【摘 要】
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目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础.方法以人胚肾293细胞基因
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目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础.方法以人胚肾293细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法克隆hTERT 5′端上游旁侧序列长约1.1kb的启动子片段,经DNA测序无误后克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTERTp重组质粒,用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A549、SPC-A-1、LTEPa-2、NCI-H446、YTMLC、GLC-82、A2,以及人胚肺成纤维细胞株MRC-5,转染48 h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性.结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1kb.DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,其5′端和3′端分别位于hTERT基因转录起始位点上游1 126 bp和43 bp,片段长度为1 084 bp.采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功.瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性,而在MRC-5细胞株中无转录活性.结论该实验克隆的1 084 bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性,在人胚肺成纤维细胞中无转录活性.hTERT启动子有可能作为调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗.
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