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目的
为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药(MDR1)基因全长cDNA逆转录病毒载体转染人脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。
方法采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应(PCR)方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。
结果(1)建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；(2)PCR方法证实外源性MDR1基因可有效地在体外整合到脐血单个核细胞中；(3)免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8%、34.7%；(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；(5)转染后的脐血细胞周期生物学特性无异常。
结论MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。