【摘 要】
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目的 利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体.方法 采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10％～30％和10％～45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳
【机 构】
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天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室
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目的 利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体.方法 采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10％～30％和10％～45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体;然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心;再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1.5 ml离心管中,测量每一个样品的吸光度值A260并提取其中的蛋白质,利用Western Blot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位.结果 核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上.结论 利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体.该法分离效果好,操作简单,为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法.
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