【摘 要】
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本研究通过筛选出一套SSR核心引物,建立青稞DNA指纹鉴定体系,为青稞品种选育、品种鉴定提供高通量检测技术方法.首先以形态差异大的24份种质为材料,对198对SSR引物进行初筛,筛选出42对多态性好、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并对之进行荧光标记.采用筛选出的42对引物对226份材料进行PCR扩增,扩增产物经毛细管电泳检测,最终筛选出28对SSR荧光引物建立基于高通量荧光SSR标记的青稞品种鉴定体系.采用28对SSR引物构建的DNA指纹图谱进行226个青稞材料的鉴定.28对SSR引物共检测到252个等
【机 构】
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云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所,昆明 650205;云南省农业科学院粮食作物研究所,昆明 650205
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本研究通过筛选出一套SSR核心引物,建立青稞DNA指纹鉴定体系,为青稞品种选育、品种鉴定提供高通量检测技术方法.首先以形态差异大的24份种质为材料,对198对SSR引物进行初筛,筛选出42对多态性好、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并对之进行荧光标记.采用筛选出的42对引物对226份材料进行PCR扩增,扩增产物经毛细管电泳检测,最终筛选出28对SSR荧光引物建立基于高通量荧光SSR标记的青稞品种鉴定体系.采用28对SSR引物构建的DNA指纹图谱进行226个青稞材料的鉴定.28对SSR引物共检测到252个等位基因,每对引物可检测到有效等位基因数为5-16个,平均等位基因数为9;基因多样性指数变异范围为0.48-0.86,平均为0.68;多态信息量(PIC)变幅为0.44-0.84,平均为0.65.226份材料的遗传距离为0-0.99,该套引物可以将大部分参试材料区分开.从28对SSR引物中选择了7对分布于不同染色体上、扩增和检测效果较好的引物(Bmag0211、Scssr07759、HVM62、EBmac0679、Scssr03907、Bmag0870、EBmac0827),构建青稞品种(系)DNA的指纹图谱库.为消除不同检测平台、不同试验批次等引起的误差,为7对SSR核心引物各主要等位变异选择相应的参照品种,作为普通聚丙烯酰胺凝胶电泳的读带依据.最终构建了在2个检测平台(毛细管电泳平台及聚丙烯酰胺凝胶电泳平台)通用的SSR分子标记青稞品种鉴定体系.
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