【摘 要】
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本研究设计了一种新的RNA提取方法,解决了RNA提取时容易被降解和污染这一关键问题.通过加入Rnase抑制剂,消除了同外源RNase对RNA的降解,结合DNA难呈低盐溶液(140mmol@L-1NaCl
【机 构】
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中国科学院沈阳应用生态研究所,北京市林业果树研究所,沈阳农业大学,大连大学生物工程学院
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本研究设计了一种新的RNA提取方法,解决了RNA提取时容易被降解和污染这一关键问题.通过加入Rnase抑制剂,消除了同外源RNase对RNA的降解,结合DNA难呈低盐溶液(140mmol@L-1NaCl)的原理,去除了DNA对RNA提取液的污染;先后使用酚和氯仿,有效地去除了蛋白质和酚类物的污染,利用抗氧化剂PVP和巯基乙醇,消除了内源酚类物质氧化变色对病毒RNA逆转录的影响.采用上述方法可以在4～5h内得到纯度高、含量大、完整性好的果树总RNA,并获得了逆转录活性较强的病毒RNA,同时使提取RNA的成本
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