【摘 要】
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目的 探讨家蝇抗真菌肽-1 A(MAF-1 A)体外抗白念珠菌(C.albicans)的细胞内作用机制.方法 取C.albicans冻存物划线接种、培养并制备浓度为2×109 cfu/L的菌悬液;分别以0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1 A作用24 h,采用荧光指示剂法检测各处理细胞内活性氧(ROS)含量的变化;取0、781及1560 mg/L抗氧化剂维生素C(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH))预处理C.albicans细胞30 min,采用微量稀释法检测MAF-1 A抗C.albica
【机 构】
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贵州医科大学 基础医学院,贵州 贵阳 550025;贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州 贵阳 550025;贵州医科大学 基础医学院,贵州 贵阳 550025
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目的 探讨家蝇抗真菌肽-1 A(MAF-1 A)体外抗白念珠菌(C.albicans)的细胞内作用机制.方法 取C.albicans冻存物划线接种、培养并制备浓度为2×109 cfu/L的菌悬液;分别以0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1 A作用24 h,采用荧光指示剂法检测各处理细胞内活性氧(ROS)含量的变化;取0、781及1560 mg/L抗氧化剂维生素C(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH))预处理C.albicans细胞30 min,采用微量稀释法检测MAF-1 A抗C.albicans的最小抑菌浓度(MIC);采用荧光指示剂法检测0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1 A作用24 h后C.albicans细胞线粒体膜电位的变化;取C.albicans脱氧核糖核酸(DNA)与等体积不同浓度(0、625、1250及2500 mg/L)MAF-1 A共孵育6 h,采用琼脂糖凝胶阻滞实验分析MAF-1 A对C.albicans DNA的影响.结果 与0 mg/L MAF-1 A相比,不同浓度MAF-1 A处理C.albicans细胞内ROS量明显增加(P0.05);凝胶阻滞实验结果 显示,不同浓度MAF-1 A与C.albicans DNA孵育后,DNA条带出现滞后及变暗淡现象,且在加样孔有滞留,这种阻滞现象随着MAF-1 A浓度升高越明显.结论 MAF-1 A不仅能诱导C.albicans细胞内大量产生ROS,还能通过与DNA的结合而发挥对C.albicans的抑制作用.
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