【摘 要】
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以"连续延伸PCR基因合成法"(姚泉洪 1999),按植物偏爱密码子,合成了全长441bp的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin VHb)基因.此方法不需用连接酶,而用高保真DNA聚合
【机 构】
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上海市农业遗传育种重点实验室,扬州大学生物科学与技术学院
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以"连续延伸PCR基因合成法"(姚泉洪 1999),按植物偏爱密码子,合成了全长441bp的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin VHb)基因.此方法不需用连接酶,而用高保真DNA聚合酶pwo及7个长度为90bp左右的长寡核苷酸引物,经一次PCR反应即完成了全长为441bp基因合成.PCR产物经BamHI和SacI酶切,克隆入pBluescript载体,合成的VHb基因经克隆和测序证实与设计一致.与报道的VHb基因相比,核苷酸改动了98个.G+C含量由原来的45.3%提高到47.8%.将该基因克隆入庆大霉素抗性基因启动子后,构建表达载体pYP2001h(VHbp).将其转入大肠杆菌菌株DH5α,在氧胁迫、缺乏、充足等三种情况下,绘制其生长曲线,探讨了合成VHb基因在原核生物中的效应.结果显示,合成的VHb基因在氧胁迫条件下能加快细菌的生长,增加产量.
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