【摘 要】
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目的建立1种能快速区分4种疱疹类病毒DNA的特异性酶切图谱。方法在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计1对通用引物，该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型(HSVI/Ⅱ)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)4种病毒。选择BamHI和BstUI 2种内切酶对同一PCR产物进行酶切，建立了能区分4种疱疹类病毒的PCR限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)法。采用PCR-R
【机 构】
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310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,310003 杭州，浙江大
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目的建立1种能快速区分4种疱疹类病毒DNA的特异性酶切图谱。
方法在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计1对通用引物，该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型(HSVI/Ⅱ)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)4种病毒。选择BamHI和BstUI 2种内切酶对同一PCR产物进行酶切，建立了能区分4种疱疹类病毒的PCR限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)法。采用PCR-RFLP和ELISA法，对75例怀疑病毒感染的患儿和38名健康儿童的血标本进行上述4种病毒DNA及IgM抗体检测。
结果4种标准病毒株PCR扩增后产物为510~592 bp，经酶切后能区分病毒种类，其最小检出量为0.1 fg，与乙型肝炎病毒、新型隐球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和人类基因组DNA无交叉反应。用该方法检测临床75份血标本，阳性23份，其中CMV、EBV和HSVⅡ感染分别为13、4和5例，HSVI为1例，同时用ELISA法检测该标本，10例阳性，分别为CMV5例、EBV3例和HSVⅡ2例。在38例健康体检儿童的血标本中上述4种病毒DNA及IgM抗体均为阴性。
结论本研究建立的4种疱疹类病毒特异性酶切图谱具有特异敏感，快速准确的特点，能检测到ELISA法不能检测到的疱疹病毒感染。
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