反向荧光偏振(FP)检测血清中HBV多聚酶基因突变

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目的:建立简便的HBV多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法。方法:利用pfu酶的3'-5'外切校正功能和荧光偏振光检测技术进行点突变的检测。首先PCR扩增HBV多聚酶基因,然后用3'标记荧光分子FAM的探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针3'第一个碱基与靶序列中待测点的碱基配对。若碱基配对正确,pfu酶可以沿探针的3'端延伸;若碱基配对错误,pfu酶须将探针3'标有荧光分子的核苷酸切掉,然后再沿探针3'端延伸。由于第一种情况,荧光分子与DNA链相连,分子量增加,则荧光偏振光值
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