【摘 要】
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本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０柱后的前后顺序,命名Ａ－５柱先
【机 构】
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重庆烟草工业有限责任公司,重庆烟草工业有限责任公司,中国科学技术大学,中国科学技术大学 合肥２３００５２,合肥２３００５２
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本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０柱后的前后顺序,命名Ａ－５柱先洗脱的活性组分为多酚氧化酶Ⅰ(ＰＰＯⅠ),后洗脱的为多酚氧化酶Ⅱ(ＰＰＯ Ⅱ)))。分离后多酚氧化酶Ⅰ的比活力是原来的７１倍,而多酚氧化酶Ⅱ的比活力为原来的１００倍。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示分离所得的多酚氧化酶为纯品,其分子量分别为４２ｋＤａ和４２．５ｋＤａ。最后测量了分离得到的ＰＰＯ的一些基本性质,结果表明多酚氧化酶Ⅰ在ｐＨ＝７,ｔ＝４０℃时具有最大活力,多酚氧化酶Ⅱ在ｐＨ＝６,ｔ＝４０℃时具有最大活力。动力学研究表明在ｐＨ＝６．５,以邻苯二酚为底物的条件下,两种酶Ｋｍ值分别为６．８ｍｍｏｌ/Ｌ和１．２ｍｍｏｌ/Ｌ。
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