【摘 要】
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目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统。方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEMT重组,构建出pGEMTHBs及pGEMTVP2并测序分析;
【机 构】
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郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,漯河医学专科学校微生物学教研室,淮阳卫生职业中专微生物学教研室
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目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统。方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEMT重组,构建出pGEMTHBs及pGEMTVP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEMTHBs中的HBs基因克隆入pGEX-5-X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEMTVP2中的VP2基因克隆入pGEX5X1HBs中,得到pGEX5-X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定。结果:pGEX5X1HBsVP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19VP2的双重抗原性。结论:成功构建pGEX5X1HBsVP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础。
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