视黄酸对豚鼠离焦性近视眼视网膜色素上皮通透性的调控

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huiz_CSU
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背景 视网膜视黄酸在离焦性近视形成中起重要作用,但目前尚不清楚其如何通过视网膜色素上皮(RPE)屏障向脉络膜传递近视信号. 目的 研究全反式视黄酸(atRA)对离焦性近视眼RPE屏障功能的影响.方法 21日龄清洁级三色豚鼠30只,用随机数字表法分为正常对照组和离焦组,-6 D凹透镜缝合于离焦组豚鼠左眼15d以制备离焦性近视模型,每天光照与黑暗周期为12 h/12 h.用角膜曲率计测量各组豚鼠的角膜曲率半径,行复方托吡卡胺滴眼液扩瞳检影验光以测量豚鼠眼球屈光度,应用A型超声法测量各组豚鼠的眼轴长度.于造模15d时处死动物并分离视网膜,体外培养RPE细胞并传代,将第3代RPE细胞用于实验,制备视网膜铺片,接种于Millcell-PET微孔滤膜插入式培养池,分别加入1×10-6、1×10-7 、1×10-8和1×10-9 mol/L atRA培养RPE细胞24 h,以加入等体积atRA溶剂的培养孔作为阴性对照,以完全培养基加MTT溶液的无细胞孔作为空白对照.采用MTT比色法检测各组RPE细胞的存活率,用CN10-EVOM2型电阻测量仪测定单层细胞跨上皮电阻(TER),计算RPE细胞的TER值,采用FM1-43型荧光染色技术检测得出RPE细胞FM1-43阳性荧光染色的相对强度值,评价RPE细胞膜泡运输变化. 结果 豚鼠模型眼屈光度为(-2.20±0.95)D,对照组为(+1.15±0.30)D,差异有统计学意义(t=14.57,P<0.01);豚鼠模型眼的眼轴长度为(8.24±0.09) mm,明显长于对照组的(7.81±0.05) mm,差异有统计学意义(t=17.20,P<0.01).原代培养豚鼠近视眼的RPE细胞,取第3代细胞用于实验.RPE细胞接种于Millcell培养池1周后细胞长满滤膜,呈单层生长.加入atRA干预24 h,RPE细胞的存活率随药物浓度的升高而逐渐降低,1×10-9 mol/L atRA组RPE细胞存活率为93.3%,1×10-8mol/L atRA组为88.2%,1×10-6mol/L atRA组和1×10-7 mol/L atRA组的RPE细胞大量死亡.不同浓度atRA组RPE细胞的TER值和RPE细胞FM143阳性荧光染色的相对强度值的总体比较差异均有统计学意义(F=43.89,P=0.00;F=26.13,P=0.00),其中1×10-8mol/L atRA组RPE细胞的TER值为(107.32±9.58) Ω/cm2,荧光染色强度为55.29±9.79,均明显高于1×10-6、1×10-7、1×10-9mol/LatRA组,差异均有统计学意义(P<0.05),FM143荧光染色部位主要在RPE细胞的细胞膜和细胞质. 结论 AtRA能够通过增加豚鼠近视眼RPE的紧密连接功能及膜泡运输改变RPE细胞的屏障功能。

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