【摘 要】
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本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2) cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接.将拼接产物与pMD20-T栽体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物
【机 构】
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海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹);海口市动物基因工程重点实验室,海南海口570228;华中师范大学生命科学学院,湖北武汉430079;海南大学农学院;海南省热带动物繁育与疫病
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本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2) cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接.将拼接产物与pMD20-T栽体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析.结果表明,克隆得到的序列全长2 455 bp,含有一个大小为2 355 bp的开放阅读框,共编码784个氨基酸,分子质量为90.2 ku,理论等电点为6.92; TLR2ORF序列与GenBank上登载的水牛核苷酸序列同源性为99.53％,与黄牛、马、人、黑猩猩和狗的核苷酸序列同源性分别为97.88％、84.94％、83.12％、82.95％和82.74％,具有很高的相似性；该蛋白是一个跨膜蛋白,存在LRR、LRR-TYP、LRRCT及TIR结构域,与Toll样受体家族成员的共同结构相一致.水牛TLR2基因的成功克隆及序列分析和结构预测为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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