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目的
构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2（TIPE2）基因过表达慢病毒载体，包装慢病毒并体外感染人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）。
方法设计TIPE2基因扩增引物，PCR扩增获得人源TIPE2目的基因片段并进行纯化，构建重组质粒GV287-TIPE2经琼脂糖凝胶电泳鉴定并进行测序鉴定。重组质粒GV287-TIPE2转染293T细胞构建GV287-TIPE2慢病毒载体，收获并浓缩病毒颗粒，实时定量PCR法检测病毒滴度。GV287-TIPE2过表达慢病毒体外转染HUVEC，荧光显微镜下鉴定转染效率，免疫印迹法检测转染细胞的TIPE2蛋白表达。
结果PCR及测序鉴定证实重组质粒GV287-TIPE2中TIPE2基因目的片断插入位置和序列正确。包装的GV287-TIPE2慢病毒载体其病毒滴度为2.0×108 TU/ml。GV287-TIPE2过表达慢病毒转染293T细胞后在荧光显微镜下可见绿色强荧光；收获病毒转染HUVEC后，在荧光显微镜下可见绿色荧光，且荧光强度不随培养时间延长而衰退。免疫印迹显示，GV287-TIPE2过表达慢病毒转染HUVEC后其TIPE2蛋白表达明显升高（P<0.001）。
结论成功构建GV287-TIPE2慢病毒载体，包装得到高浓度病毒液，转染HUVEC能稳定过表达TIPE2蛋白，为后续TIPE2的功能和机理研究奠定了实验基础