【摘 要】
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目的 探讨白花丹素对人骨肉瘤细胞凋亡的调控作用及相关机制,为其临床治疗骨肉瘤提供新参考.方法 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)确定白花丹素抑制人骨肉瘤MG63和HOS细胞半抑制浓度(IC50).转染小干扰RNA(siR-NA)沉默MG63和HOS细胞中血红素氧合酶-1(HO-1)表达,转染72 h后利用嘌呤霉素(2μg/mL)筛选细胞稳定株,采用蛋白质印迹法验证转染效率.MG63和HOS细胞白花丹素组分别加入上述测定的IC50浓度白花丹素,对照组不予特殊干预.24 h后蛋白质印迹法检测HO-1蛋白表达;
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院骨科,四川 泸州 646000;西南医科大学附属医院肿瘤科,四川 泸州 646000
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目的 探讨白花丹素对人骨肉瘤细胞凋亡的调控作用及相关机制,为其临床治疗骨肉瘤提供新参考.方法 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)确定白花丹素抑制人骨肉瘤MG63和HOS细胞半抑制浓度(IC50).转染小干扰RNA(siR-NA)沉默MG63和HOS细胞中血红素氧合酶-1(HO-1)表达,转染72 h后利用嘌呤霉素(2μg/mL)筛选细胞稳定株,采用蛋白质印迹法验证转染效率.MG63和HOS细胞白花丹素组分别加入上述测定的IC50浓度白花丹素,对照组不予特殊干预.24 h后蛋白质印迹法检测HO-1蛋白表达;进一步将对照组MG63细胞及转染HO-1-siRNA的MG63细胞稳定株再行上述干预,采用蛋白质印迹法检测HO-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Bax蛋白表达;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果 CCK-8结果显示,白花丹素诱导MG63和HOS细胞IC50浓度分别为14.32和12.21μmol/L.蛋白质印迹法结果显示,HOS细胞中对照组、shRNA-HO-1组和Mock组HO-1蛋白表达量分别为0.57±0.03、0.35±0.04和0.55±0.03,F=37.311,P<0.001;shRNA-HO-1组HO-1蛋白表达量低于对照组和Mock组,均P<0.001,表明沉默后蛋白表达降低.MG63细胞中对照组、shRNA-HO-1组和Mock组HO-1蛋白表达量分别为0.38±0.02、0.25±0.02和0.39±0.04,F=23.853,P<0.001;shRNA-HO-1组HO-1蛋白表达量低于对照组和Mock组,均P=0.001,表明沉默后蛋白表达降低.经白花丹素干预后,HOS细胞中白花丹素组与对照组HO-1蛋白相对表达量分别为0.95±0.04和1.61±0.05,t=-17.778,P<0.001.MG63细胞中白花丹素组与对照组HO-1蛋白相对表达量分别为0.45±0.02和1.26±0.06,t=-21.537,P<0.001.转染HO-1-siRNA的MG63细胞稳定株后,对照组、白花丹素组、siRNA-HO-1组和siRNA-HO-1+白花丹素组HO-1蛋白表达量分别为1.64±0.05、1.18±0.08、0.32±0.02和0.31±0.02,F=534.345,P<0.001;Bax蛋白表达量分别为1.11±0.02、1.52±0.03、0.89±0.02和0.84±0.02,F=454.770,P<0.001;Caspase-3蛋白表达量分别为0.61±0.04、0.79±0.03、0.49±0.01和0.67±0.02,F=52.799,P<0.001.流式细胞术检测结果示,白花丹素(14.32μmol/L)干预24 h,MG63细胞中对照组与白花丹素组凋亡率分别为(4.23±1.13)％和(41.90±2.18)％,t=26.621,P<0.001.转染HO-1-siRNA质粒骨肉瘤MG63细胞中siRNA-HO-1组与siRNA-HO-1+白花丹素组细胞凋亡率分别为(4.37±0.56)％和(17.38±1.59)％,t=13.352,P<0.001.结论 白花丹素可以促进骨肉瘤MG63细胞凋亡,其机制可能与调控HO-1表达有关.
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