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目的 通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)胞核中乙酰肝素酶(HPA)和RNA聚合酶Ⅱ (Pol Ⅱ)的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的作用,探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转录调控的作用.方法 用低氧模型模拟剂Cocl2建立低氧模型(含Cocl2100 μmol/L的培养液培养48 h).免疫荧光染色法观察HPA与Pol Ⅱ的表达;免疫沉淀法半定量分析HPA及Pol Ⅱ的相互结合作用;染色质免疫沉淀(ChIP)联合实时定量PCR分析两组细胞中HPA与VEGF基因启动子之间的相互作用.结果 (1)免疫荧光染色结果显示低氧诱导组HRECs胞核内HPA荧光和Pol Ⅱ荧光均较正常对照组增强,且低氧诱导组胞核内HPA分布与PolⅡ相吻合.(2)免疫沉淀结果表明在低氧诱导HRECs中HPA及Pol Ⅱ相互结合共同作用,而对照组中HPA及Pol Ⅱ则无结合.(3) ChIP联合实时定量PCR实验结果显示HPA及Pol Ⅱ与VEGF启动子结合的高发生区段主要位于VEGF启动子序列-1165与-984之间,低氧诱导HRECs细胞核内HPA及Pol Ⅱ结合VEGF基因启动子水平均较正常组升高(t=-13.591,P=0.001;t=-3.188,P =0.049).结论 在低氧诱导的HRECs中,核内HPA与VEGF基因启动子直接结合,并参与了VEGF基因转录活性的调控。