【摘 要】
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目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)β-溶血素基因(hlb)缺失突变菌株的构建.方法:提取金葡菌COL基因组DNA,采用PCR扩增hlb基因上下游片段,构建同源重组序列;将卡那霉素抗性基因
【机 构】
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广西医科大学,南宁,530000;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所,北京,100850;广西医科大学,南宁530000;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科
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目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)β-溶血素基因(hlb)缺失突变菌株的构建.方法:提取金葡菌COL基因组DNA,采用PCR扩增hlb基因上下游片段,构建同源重组序列;将卡那霉素抗性基因(kan)与同源重组序列连接,构建含有kan基因的同源重组序列;利用卡那霉素和氯霉素筛选获得已同源重组菌株和PCR、RT-PCR和Western blot方法鉴定突变菌株中hlb基因的表达.结果:基因组PCR结果显示,突变菌株COLhlb的基因组缺失hlb基因,以及进一步的RT-PCR和Western Blot结果均表明COLhlb菌株不表达hlb.结论:金葡菌hlb基因敲除菌株COLhib构建成功,为β-溶血素参与金葡菌致病过程的机制研究奠定基础.
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