【摘 要】
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采用特异性引物,以菲、芘降解菌株ZL5的代谢性质粒为模板,扩增出邻苯二酚2,3-双加氧酶(C23O)基因.将该基因和表达载体pET-30a(+)连接,转化E.coli JM109(DE3),获得了高效表达
【机 构】
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中国科学院沈阳应用生态研究所,广西大学分子遗传研究所
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采用特异性引物,以菲、芘降解菌株ZL5的代谢性质粒为模板,扩增出邻苯二酚2,3-双加氧酶(C23O)基因.将该基因和表达载体pET-30a(+)连接,转化E.coli JM109(DE3),获得了高效表达的转化子.SDS-PAGE结果表明,转化子的C23O蛋白不仅在细胞内存在,而且能被分泌到胞外,薄层扫描显示,转化子细胞内和细胞外表达蛋白总量占细胞总蛋白的42%.酶活分析表明,分布在转化子细胞内、外的表达蛋白都具有较高的C23O比活力.Southern杂交将菌株ZL5的C23O基因定位在内生质粒的不同酶切
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