【摘 要】
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目的为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础.方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3.1-TGF-β1真核表达载体
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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目的为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础.方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3.1-TGF-β1真核表达载体,经Fugene6介导质粒转染3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGF-β1 mRNA在真核细胞中的表达.结果重组真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β1经限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ酶切,电泳后显示1.35kb的hTGF-β1目的片段和5.40kb的pcDNA3.1载体片段,证明重组质粒连接正确;经RT-PCR检测了hTGF-β1在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染3T3细胞后hTGF-β1mRNA的表达明显增强.结论重组真核表达载体构建正确,并能在真核细胞3T3中表达hTGF-β1 mRNA,为其在软骨组织工程中的基因转染奠定了基础.
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