【摘 要】
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本研究旨在建立稳定表达小鼠CXC型趋化因子受体4(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)基因的小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)并研究其功能。采用脂质体
【机 构】
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徐州医学院附属医院血液科,江苏省徐州市儿童医院感染科
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本研究旨在建立稳定表达小鼠CXC型趋化因子受体4(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)基因的小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)并研究其功能。采用脂质体转染法将重组慢病毒表达载体LV-CXCR4-IRES-EGFP与包装质粒pMD2.G及包膜蛋白质粒pSPAX2共转染293FT包装细胞,应用超速离心法浓缩病毒颗粒;通过调整感染复数(MOI)、感染时间、促进病毒吸附等方法优化慢病毒感染小鼠MSC的条件,建立过表达CXCR4的MSC,采用荧光显微镜观察EGFP表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4表达,绘制细胞生长曲线检测增殖能力,Annexin-Ⅴ和7-AAD双染后应用流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测迁移能力。结果发现,通过优化感染条件,重组慢病毒载体对MSC可获得较高感染效率,感染后72 h在荧光显微镜下可观察到较强EGFP表达,流式细胞术检测到MSC表面CXCR4的表达明显增加。细胞生长曲线和凋亡实验显示,过表达CXCR4不会显著影响MSC增殖和凋亡。Transwell实验显示过表达CXCR4可增强MSC迁移能力。结论:慢病毒载体可介导外源性基因CXCR4在小鼠MSC高效表达。
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