【摘 要】
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目的：筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的PCR-DGGE实验条件.方法：采用TouchDown-PCR技术扩增乌头叶面细菌16S rDNA V3区域和真菌18S rDNA～5.8S rDNA间隔区序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化.采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间.结果：乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30％～65
【机 构】
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成都中医药大学,中药材标准化教育部重点实验室,中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,成都611137
【出 处】
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2016首届中国中药资源大会暨CSNR中药及天然药物资源研究专业委员会第十二届学术年会
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目的：筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的PCR-DGGE实验条件.方法：采用TouchDown-PCR技术扩增乌头叶面细菌16S rDNA V3区域和真菌18S rDNA～5.8S rDNA间隔区序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化.采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间.结果：乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30％～65％ (Gel 10％),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间7h.乌头叶面真菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度25％～45％(Gel 8％),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间10h.结论：利用以上优化条件能有效分离乌头叶面细菌16S rDNA V3区及真菌18S rDNA～5.8SrDNA间隔区序列,为乌头叶面细菌,真菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术基础.
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