携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

来源 :第一军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mangshengsun1
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目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法.方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定.结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞.PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克
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