探讨大蒜素对铅中毒大鼠海马细胞凋亡损伤的抑制作用。
方法60只雄性3周龄SD大鼠按随机数字表法分成6组，每组10只，分别为低剂量(A－L)、中剂量(A－M)和高剂量(A－H)大蒜素组，铅暴露(Pb)组，二巯基丁二酸(DMSA)组和空白对照组。空白对照组提供超纯水，其余5组饮用1.0 g/L的醋酸铅水溶液，20 d后换为超纯水并进行灌胃给药，A－L组、A－M组和A－H组大蒜素用药剂量分别为2.7 mg/kg、5.4 mg/kg、10.8 mg/kg，DMSA剂量为10.8 mg/kg，Pb组予9 g/L盐水。模型建立后处死大鼠收集全血和海马组织。检测血铅和海马组织铅浓度，采用TUNEL染色法检测海马组织细胞凋亡水平，实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶－3(caspase－3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶－9(caspase－9)和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)的mRNA和激活型蛋白表达量，采用免疫荧光技术检测细胞色素C在胞质内的表达情况。
结果1．A－L组、A－M组和A－H组大鼠血铅和海马组织铅水平[(190.54±11.33) μg/L，(0.28±0.03) μg/L；(159.55±16.94) μg/L，(0.22±0.06) μg/L；(116.62±8.85) μg/L，(0.19±0.01) μg/L]显著低于Pb组[( 271.34±21.23) μg/L，(0.31±0.04) μg/L]，差异均有统计学意义(均P<0.05)；DMSA组大鼠血铅和海马组织铅水平[(50.12±7.44) μg/L，(0.15±0.03) μg/L]低于A－L组、A－M组和A－H组。2.TUNEL染色结果显示，A－L组、A－M组和A－H组大鼠海马细胞凋亡水平显著低于Pb组[(2.81±0.17)%, (2.08±0.28)%，(1.33±0.08)%比(4.23±0.17)%]，差异均有统计学意义(均P<0.05)；DMSA组大鼠海马细胞凋亡水平[(2.63±0.32)%]高于A－M组和A－H组，低于Pb组。3.qPCR结果表明，与Pb组比较，A－H组caspase－3、caspase－9和PARP的mRNA均显著下调(1.07±0.05，1.02±0.02，1.11±0.02比1.34±0.02，1.26±0.05，1.93±0.07)，差异均有统计学意义(均P<0.05)；A－L组、A－M组caspase－3和PARP mRNA表达量下调(1.21±0.05，1.43±0.12、1.16±0.02，1.20±0.06比1.34±0.02，1.93±0.07)，差异均有统计学意义(均P<0.05)，caspase－9 mRNA无明显变化；A－H组caspase－3、caspase－9和PARP的mRNA水平(1.07±0.05，1.02±0.02，1.11±0.02)均低于DMSA组(1.14±0.02，1.15±0.08，1.32±0.05)。4.Wes－tern blot结果：与Pb组比较，A－H组激活型caspase－3、caspase－9和PARP蛋白表达量显著下调(A－H组：0.44±0.15、0.58±0.25、0.31±0.19和0.23±0.07比Pb组：0.69±0.13、0.72±0.22、0.55±0.21和0.43±0.10)，A－M组激活型caspase－9蛋白表达量低于Pb组(A－M组：0.59±0.18比Pb组：0.72±0.22)，差异均有统计学意义(均P<0.05); A－H组激活型caspase－3和RARP蛋白表达低于DMSA组。5.荧光染色结果显示A－L组、A－M组和A－H组细胞色素C在胞质中的表达量均显著低于Pb组及DMSA组。
结论大蒜素在降低SD大鼠海马组织铅的同时，可通过线粒体通路抑制铅中毒大鼠海马组织细胞凋亡，大蒜素抑制凋亡损伤的作用可能优于DMSA。