探讨转化生长因子β1 (TGF-β1) 对羊膜WISH细胞中基质金属蛋白酶9 (MMP-9) 及其组织抑制物1 (TIMP-1) 和核因子κB (NF-κB) 表达的影响及其调控机制。
方法在羊膜细胞系WISH细胞中分别加入不同浓度 (0、2、10、20 ng/ml) 的TGF-β1,培养24 h后,分别应用逆转录 (RT) PCR技术检测WISH细胞中TIMP-1及MMP-9 mRNA的表达水平,蛋白印迹法检测TIMP-1、MMP-9及NF-κB蛋白的表达。
结果(1) TIMP-1 mRNA及蛋白表达:经不同浓度TGF-β1 (0、2、10、20 ng/ml) 处理后,WISH细胞中TIMP-1 mRNA的表达水平随TGF-β1浓度的增加而升高,分别为0.413±0.036、0.623±0.058、1.392±0.124及1.387±0.102,其中2、10及20 ng/ml浓度时TIMP-1 mRNA表达水平分别与0 ng/ml浓度比较,差异均有统计学意义 (P<0.05) ;WISH细胞中TIMP-1蛋白表达水平随TGF-β1浓度的增加而升高,分别为0.357±0.031、0.596±0.048、1.243±0.097及1.359±0.121,2、10及20 ng/ml浓度的TGF-β1处理后,WISH细胞中TIMP-1蛋白表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义 (P<0.05) 。 (2) MMP-9 mRNA及蛋白表达:经不同浓度的TGF-β1 (0、2、10、20 ng/ml) 处理后,WISH细胞中MMP-9 mRNA表达水平随TGF-β1浓度的增加而降低,分别为1.325±0.056、0.987±0.081、0.610±0.034及0.347±0.023,其中2、10及20 ng/ml浓度时MMP-9 mRNA表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义 (P<0.05) ; WISH细胞中MMP-9蛋白表达水平随TGF-β1浓度的增加而降低,分别为1.119±0.064、1.008±0.052、0.578±0.041及0.401±0.015,2、10及20 ng/ml浓度时MMP-9蛋白的表达水平分别与0 ng/ml浓度时比较,差异有统计学意义 (P<0.05) 。 (3) NF-κB蛋白表达:经2、10、20 ng/ml浓度时TGF-β1处理后,WISH细胞中NF-κB蛋白的表达水平分别为1.116±0.045、0.796±0.041及0.359±0.021,分别与0 ng/ml浓度时 (1.423±0.065) 比较,差异均有统计学意义 (P<0.05) 。
结论羊膜WISH细胞中TGF-β1浓度降低,可引起羊膜细胞中TIMP-1 mRNA及蛋白表达水平下降,MMP-9 mRNA及蛋白表达水平升高,导致两者在羊膜组织中的比例失衡,此与胎膜破裂的发生机制有关; TGF-β1通过抑制羊膜细胞中NF-κB通路而调控MMP-9的表达,从而对胎膜破裂有一定的保护作用。