【摘 要】
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目的 探讨环状RNA _0054345(hsa_circ_0054345)是否通过靶向微小RNA-206(miR-206)调控转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡.方法 体外培养大鼠肝
【机 构】
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厦门大学附属第一医院,福建厦门361004
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目的 探讨环状RNA _0054345(hsa_circ_0054345)是否通过靶向微小RNA-206(miR-206)调控转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡.方法 体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,使用TGF-β1处理细胞建立模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hsa_circ_0054345、miR-206的表达量;实验分组为:对照组、TGF-β1组、TGF-β1+si-con组、TGF-β1+ si-circ0054345组、TGF-β1+si-circ005434 5+anti-miR-con组、TGF-β1+sicirc0054345 +anti-miR-206组.甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证hsa_circ_0054345、miR-206的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α平滑肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col I)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量.结果 与对照组比较,TGF-β1组hsa_ circ_ 0054345的表达水平明显升高(P＜0.05),miR-206的表达水平明显降低(P＜0.05),细胞存活率明显升高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),α-SMA、Col Ⅰ、TIMP-1和Bcl-2蛋白水平明显升高(P＜0.05),B ax蛋白水平明显降低(P＜0.05);与TGF-β1 +si-con组比较,TGF-β1+ si-circ0054345组细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),α-SMA、Col Ⅰ、TIMP-1和Bcl-2蛋白水平明显降低(P＜0.05),Bax蛋白水平明显升高(P＜0.05);双荧光素酶报告实验证实hsa_circ_0054345可靶向结合miR-206;与TGF-β1+ si-circ0054345+ anti-miR-con组比较,TGF-β1 +si-circ0054345 +anti-miR-206组细胞存活率明显升高(P＜0.05),α-SMA、Col Ⅰ和TIMP-1/Bcl-2蛋白水平明显升高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),Bax蛋白水平明显降低(P＜0.05).结论 抑制hsa_circ_0054345表达可能通过靶向上调miR-206的表达从而抑制TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及诱导细胞凋亡.
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