【摘 要】
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目的利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域,为进一步研究其结构和功能奠定基础.方法我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒,在大肠杆菌中表达出PH结构域,
【机 构】
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复旦大学医学院生化与分子生物学系,复旦大学生命科学学院生化系
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目的利用原核系统表达原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶B(PKB)的PH结构域,为进一步研究其结构和功能奠定基础.方法我们构建了PKB的PH结构域的表达质粒,在大肠杆菌中表达出PH结构域,并利用蛋白N端加入的组氨酸标签进行亲和层析及离子交换层析纯化蛋白.结果在大肠杆菌中表达的PH结构域以包涵体形式存在,经变性和复性后成为具有天然构象的可溶性蛋白,经亲和层析和离子交换层析纯化的PH结构域具有与磷脂酰肌醇PI*.4,5*.P2的结合能力,证明其具有生物学活性.结论本方法成功表达纯化了PKB的PH结构域,可用作PH结构域
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