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摘要 香蕉弯孢霉叶斑病菌[Curuularia lunata(wakker)Boed]适合生长的培养基有PSA、PDA和OMA；菌落生长、产孢和孢子萌发最适宜的温度为25～30℃，pH要求不严格为5～9；在碳源和氮源中，蔗糖、葡萄糖、尿素、磷酸氢二氨和硝酸钠有利于病菌生长和产孢；分生孢子萌发对湿度有严格的要求，RH≥80％以上分生孢子萌发，随湿度增加萌发率增高；光照对菌丝体无显著影响，光暗交替有利于孢子的形成；孢子致死温度为55℃(10 min)。药物敏感性测定结果表明，6％戊唑醇微乳剂、25％丙环唑乳油、25％咪鲜胺水乳剂、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲环唑乳油对香蕉弯孢霉叶斑病菌菌丝生长均有较好的抑制效果，其中25％咪鲜胺水乳剂和25％苯醚甲环唑乳油的抑菌效果最好。
关键词 香蕉；香蕉弯孢霉叶斑病菌；生物学特性；杀菌剂敏感性
中图分类号 S436.67
香蕉弯孢霉叶斑病(Curuularia leaf speckle)是近年来我国香蕉生产上发生的一种常见病害，由新月弯孢[Curvularia lunata(Wakker)Boed]引起，病斑呈灰色大长块状，边缘褐色。作者于2004～2006年通过对海口、儋州、乐东、东方、三亚、五指山、琼中、屯昌、昌江、澄迈、临高、文昌、琼海、白沙等市县香蕉病害的调查，发现该病在各海南香蕉产区分布广泛且常与香蕉灰纹病混生，危害性很大并有蔓延加重的趋势。
目前，国内对香蕉弯孢霉叶斑病菌的生物学特性、流行规律和防治等方面的研究尚未见报道，而在生产上对其发病条件与防治方法只是简单地等同于灰纹病，并没有开展深入的研究而进行有效防治。鉴于本病的严重性，本试验对病原菌的生物学特性及其药物敏感性等方面进行了初步研究，以便为病害的发生、流行和防治提供必要的理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 供试菌株
供试菌株3株，均分离自香蕉并经过形态学鉴定，各菌株资料见表1。
1．1．2 供试培养基及化学药剂
PDA、PSA、PCA、OMA、查氏琼脂培养基、香蕉叶煎汁培养基(香蕉叶300 g，葡萄糖20 g，琼脂粉18 g，水1 000 mL)、香蕉果煎汁培养基(香蕉果300 g，葡萄糖20 g，琼脂粉18 g，水1 000 mL)、PDA 香蕉叶煎汁培养基(PDA和香蕉叶煎汁培养基等量混合)、PSA 香蕉叶煎汁培养基等9种培养基。供试化学药剂见表2。
1．2 方法
为了试验的一致性，均采用在pH＝5.5的PDA培养基平板上28℃培养5 d的菌种，用直径0.5 cm的打孔器统一打菌块，培养皿直径为9 cm，每皿15 mL培养基，每处理3次重复，结果取平均值，测量菌落直径采用十字交叉法。
1．2．1 培养基对菌丝生长的影响
选用1．1．2所列举的培养基，将供试菌株分别接种在直径为9 cm平板中央，在28℃恒温箱连续培养3 d后，观察菌落形态和测量菌落直径，每处理重复3次。
1．2．2 温度对菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响
将病原菌接种在PDA培养基上，于15、20、25、28、30、35、38℃和40℃培养箱培养3d后，测量菌落直径；7d后，将产生的分生孢子用20mL灭菌水洗下，以Neubauer血球计数板法在显微镜下检查分生孢子数(下同)。
采用载玻片悬滴法测定对分生孢子萌发的影响，温度设置为10、15、20、25、30、35℃和40℃，1 2 h内每隔2 h镜检萌发情况，计算萌发率。
1．2．5 光照对菌丝生长的影响
在PDA培养基上接种病菌后，分别置于完全黑暗、连续光照、光暗交替(12 h光照，12 h黑暗)3种不同光照条件下进行培养，每处理3个重复。培养温度为28℃，2 d后测量菌落直径。
1．2．6 湿度对分生孢子萌发的影响
分生孢子液在载玻片上阴干后，置于RH75％、80％、85％、90％、95％、98％、100％及水滴8个等级湿度的保湿器内，28℃下培养。12 h后检查孢子萌发率。每次镜檢300个分生孢子，重复3次。
1．2．7 孢子的致死温度测定
将孢子悬浮液分别倒入45个试管中，每试管2 mL，每处理3个试管，分别放入40、45、50、55、60℃的恒温水浴锅，处理10 min后，立即用冷水降温，后放入28℃的恒温箱中，3 d后观察分生孢子萌发状况。
1．2．8 菌丝生长对杀菌剂敏感性测定
采用生长速率法测定菌丝生长情况。将供试药剂稀释成不同浓度梯度制成PDA含药培养基，病菌培养96 h后检查各处理菌的生长情况，十字交叉法量菌落直径，最后计算抑制生长率，求出毒力回归方程，计算EC50。
2 结果与分析
2．1 培养基对菌丝生长的影响
试验结果表明(表3)：PSA、PDA、PDA 香蕉叶煎汁培养基和PSA 香蕉叶煎汁培养基对菌落生长大小影响不显著，但是对菌落形态影响显著。最适菌落生长的是PSA和PDA，均表现为菌落厚而致密，茸状，墨绿色；其次是OMA；再次为PDA 香蕉叶煎汁培养基和PSA 香蕉叶煎汁培养基，表现为菌落较以上稀薄，呈白绿色；不适合菌落生长的为PCA、查氏琼脂培养基、香蕉叶煎汁培养基、香蕉果煎汁培养基，表现为菌落稀薄，灰褐色或灰白色，无明显气生菌丝。
2．2 温度对菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响
从图1可知：温度对菌丝生长影响很大，该菌在15～38℃时，菌丝均可生长，以25～30℃生长最快，温度高于40℃不生长，说明该菌适宜相对中温偏高的环境。从图2可以看出，在25～30℃最有利 于病菌产孢；当温度高于30℃时，随着温度升高产孢量急剧减少。由图3可知：分生孢子在10～40℃均能萌发，最适温度为25～30℃。
2．3 pH对菌落生长、产孢和孢子萌发的影响
试验结果表明：该病菌在pH3～11范围内均能生长和产孢，适合菌落生长和产孢的pH为5～9，以pH为7最适合病菌菌落生长和产孢，当pH高于9时，其产孢量急剧下降(图4，图5)。分生孢子在pH3～10均可萌发，pH7～9时，分生孢子萌发率超过50％，在pH7～8时萌发率最高，即在中性偏碱条件下，分生孢子萌发较好(图6)。由此可见，该病菌生长、产孢和孢子萌发对pH要求不严格。
2．4 碳、氮源对菌丝生长的影响
试验结果表明：碳源除柠檬酸外，对菌落大小无显著影响(表4)，但对菌落形态影响显著。最适碳源为蔗糖和葡萄糖，表现为较以不含碳源的培养基菌落厚而致密，灰白色；其次是乳糖，菌落较以蔗糖和葡萄糖为碳源稍薄些；不适合做碳源的是甘露醇和柠檬酸，表现为菌落稀薄，透明，白绿色或无色。最适氮源为尿素、磷酸氢二氨、硝酸钠，表现为菌落厚而致密，灰白色或雪白色。
2．5 光照对菌丝生长的影响
测试结果(图7)表明，12 h光暗交替较连续光照和连续黑暗更有利于菌丝生长。
2．6 湿度对分生孢子萌发的影响
由图8可知，不同湿度对分生孢子萌发有明显的影响。相对湿度高于80％才能萌发，并随湿度增加，萌发率亦增加，在相对湿度100％和水滴下萌发率达到约95％。说明萌发需要高湿条件，水滴和相对湿度大、保持时间长更利于萌发。在RH80％～95％时，虽能萌发，但芽管较短，需要时间长。当RH95％以上，萌发速度快，产生芽管长，有菌丝状分支。
2．7 孢子的致死温度测定
试验结果表明：分生孢子的致死温度为55℃，10 min，经过50℃的处理仍有11％的萌发率，55℃及以上处理未见孢子萌发。
2．8 菌丝生长对杀菌剂敏感性测定
各供试药剂毒力回归式、斜率、EC50和相关系数(R)结果见表5。供试药剂按照EC50基本上可以归为2类：25％丙环唑乳油和25％咪鲜胺水乳剂，EC50分别为0.3061 ug/mL和0.450 2ug/mL，是供试药剂中EC50非常小的，说明这两种药剂抑菌效果好；6％戊唑醇微乳剂、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲环唑乳油，EC50在0.796 3～1.247ug/mL之间，说明这3种药剂抑菌效果较好。总体来看，5种供试药剂的EC50均较小，说明这些药剂对香蕉弯孢霉叶斑病菌均有很好的抑菌效果。回归方程的斜率与杀菌剂对病菌的敏感性成正比。按回归方程的斜率，供试药剂可以分为3类：6％戊唑醇微乳剂斜率值K为2.5627，是供试药剂中斜率最大的，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这种药剂的敏感性最高。25％咪鲜胺水乳剂、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲环唑乳油，斜率值在0.989 3～1.455之间，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这2种药剂的敏感性较高。25％丙环唑乳油斜率值K为0.7371，是供试药剂中斜率最小的，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这种药剂的敏感性较低。
3 讨论
研究认为：①病原菌在不同培养基上菌丝生长，以PSA和PDA为好。②菌丝生长对温度的要求相对比较严格，最适温在25～30℃，亦利于产孢和分生孢子萌发。分生孢子萌发要求湿度较高，通常在RH80％以上才能萌发。RH≥98％或有水滴萌发最好，萌发率可达约95％。由此可见，香蕉弯孢霉叶斑病菌适宜于中温偏高和高湿环境，与在田间调查时病害发生发展温湿度一致。③不同的碳源和氮源對病原菌的生长影响较大，在有碳氮源与无碳氮源条件下菌落形态差异显著，碳源以蔗糖和葡萄糖为好，但病原菌对氮源的选择不很严格。④菌丝生长对pH适应的范围较宽，pH5～9均生长很好。分生孢子在pH5～9的酸碱环境中也均能萌发。光照对菌丝生长无显著促进作用。⑤分生孢子的致死温度为55℃(10 min)。⑥不同杀菌剂药物敏感性测定中EC50越小、斜率越大说明病原菌对药剂的反应灵敏度越高，即随着浓度的增加，抑菌率明显增大。在试验供试药剂中，EC5。低的药剂其毒力回归方程斜率值往往也较小。综合考虑供试药剂的EC50和斜率发现，25％咪鲜胺水乳剂和25％苯醚甲环唑乳油对香蕉弯孢霉叶斑病菌的抑菌效果好且敏感性高。室内的药物敏感性测定结果仅仅说明该杀菌剂在离体条件下对香蕉弯孢霉叶斑病菌的直接活性，田间的防治效果受到的影响因素很多，有待于试验进一步证实。
关键词 香蕉；香蕉弯孢霉叶斑病菌；生物学特性；杀菌剂敏感性
中图分类号 S436.67
香蕉弯孢霉叶斑病(Curuularia leaf speckle)是近年来我国香蕉生产上发生的一种常见病害，由新月弯孢[Curvularia lunata(Wakker)Boed]引起，病斑呈灰色大长块状，边缘褐色。作者于2004～2006年通过对海口、儋州、乐东、东方、三亚、五指山、琼中、屯昌、昌江、澄迈、临高、文昌、琼海、白沙等市县香蕉病害的调查，发现该病在各海南香蕉产区分布广泛且常与香蕉灰纹病混生，危害性很大并有蔓延加重的趋势。
目前，国内对香蕉弯孢霉叶斑病菌的生物学特性、流行规律和防治等方面的研究尚未见报道，而在生产上对其发病条件与防治方法只是简单地等同于灰纹病，并没有开展深入的研究而进行有效防治。鉴于本病的严重性，本试验对病原菌的生物学特性及其药物敏感性等方面进行了初步研究，以便为病害的发生、流行和防治提供必要的理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 供试菌株
供试菌株3株，均分离自香蕉并经过形态学鉴定，各菌株资料见表1。
1．1．2 供试培养基及化学药剂
PDA、PSA、PCA、OMA、查氏琼脂培养基、香蕉叶煎汁培养基(香蕉叶300 g，葡萄糖20 g，琼脂粉18 g，水1 000 mL)、香蕉果煎汁培养基(香蕉果300 g，葡萄糖20 g，琼脂粉18 g，水1 000 mL)、PDA 香蕉叶煎汁培养基(PDA和香蕉叶煎汁培养基等量混合)、PSA 香蕉叶煎汁培养基等9种培养基。供试化学药剂见表2。
1．2 方法
为了试验的一致性，均采用在pH＝5.5的PDA培养基平板上28℃培养5 d的菌种，用直径0.5 cm的打孔器统一打菌块，培养皿直径为9 cm，每皿15 mL培养基，每处理3次重复，结果取平均值，测量菌落直径采用十字交叉法。
1．2．1 培养基对菌丝生长的影响
选用1．1．2所列举的培养基，将供试菌株分别接种在直径为9 cm平板中央，在28℃恒温箱连续培养3 d后，观察菌落形态和测量菌落直径，每处理重复3次。
1．2．2 温度对菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响
将病原菌接种在PDA培养基上，于15、20、25、28、30、35、38℃和40℃培养箱培养3d后，测量菌落直径；7d后，将产生的分生孢子用20mL灭菌水洗下，以Neubauer血球计数板法在显微镜下检查分生孢子数(下同)。
采用载玻片悬滴法测定对分生孢子萌发的影响，温度设置为10、15、20、25、30、35℃和40℃，1 2 h内每隔2 h镜检萌发情况，计算萌发率。
1．2．5 光照对菌丝生长的影响
在PDA培养基上接种病菌后，分别置于完全黑暗、连续光照、光暗交替(12 h光照，12 h黑暗)3种不同光照条件下进行培养，每处理3个重复。培养温度为28℃，2 d后测量菌落直径。
1．2．6 湿度对分生孢子萌发的影响
分生孢子液在载玻片上阴干后，置于RH75％、80％、85％、90％、95％、98％、100％及水滴8个等级湿度的保湿器内，28℃下培养。12 h后检查孢子萌发率。每次镜檢300个分生孢子，重复3次。
1．2．7 孢子的致死温度测定
将孢子悬浮液分别倒入45个试管中，每试管2 mL，每处理3个试管，分别放入40、45、50、55、60℃的恒温水浴锅，处理10 min后，立即用冷水降温，后放入28℃的恒温箱中，3 d后观察分生孢子萌发状况。
1．2．8 菌丝生长对杀菌剂敏感性测定
采用生长速率法测定菌丝生长情况。将供试药剂稀释成不同浓度梯度制成PDA含药培养基，病菌培养96 h后检查各处理菌的生长情况，十字交叉法量菌落直径，最后计算抑制生长率，求出毒力回归方程，计算EC50。
2 结果与分析
2．1 培养基对菌丝生长的影响
试验结果表明(表3)：PSA、PDA、PDA 香蕉叶煎汁培养基和PSA 香蕉叶煎汁培养基对菌落生长大小影响不显著，但是对菌落形态影响显著。最适菌落生长的是PSA和PDA，均表现为菌落厚而致密，茸状，墨绿色；其次是OMA；再次为PDA 香蕉叶煎汁培养基和PSA 香蕉叶煎汁培养基，表现为菌落较以上稀薄，呈白绿色；不适合菌落生长的为PCA、查氏琼脂培养基、香蕉叶煎汁培养基、香蕉果煎汁培养基，表现为菌落稀薄，灰褐色或灰白色，无明显气生菌丝。
2．2 温度对菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响
从图1可知：温度对菌丝生长影响很大，该菌在15～38℃时，菌丝均可生长，以25～30℃生长最快，温度高于40℃不生长，说明该菌适宜相对中温偏高的环境。从图2可以看出，在25～30℃最有利 于病菌产孢；当温度高于30℃时，随着温度升高产孢量急剧减少。由图3可知：分生孢子在10～40℃均能萌发，最适温度为25～30℃。
2．3 pH对菌落生长、产孢和孢子萌发的影响
试验结果表明：该病菌在pH3～11范围内均能生长和产孢，适合菌落生长和产孢的pH为5～9，以pH为7最适合病菌菌落生长和产孢，当pH高于9时，其产孢量急剧下降(图4，图5)。分生孢子在pH3～10均可萌发，pH7～9时，分生孢子萌发率超过50％，在pH7～8时萌发率最高，即在中性偏碱条件下，分生孢子萌发较好(图6)。由此可见，该病菌生长、产孢和孢子萌发对pH要求不严格。
2．4 碳、氮源对菌丝生长的影响
试验结果表明：碳源除柠檬酸外，对菌落大小无显著影响(表4)，但对菌落形态影响显著。最适碳源为蔗糖和葡萄糖，表现为较以不含碳源的培养基菌落厚而致密，灰白色；其次是乳糖，菌落较以蔗糖和葡萄糖为碳源稍薄些；不适合做碳源的是甘露醇和柠檬酸，表现为菌落稀薄，透明，白绿色或无色。最适氮源为尿素、磷酸氢二氨、硝酸钠，表现为菌落厚而致密，灰白色或雪白色。
2．5 光照对菌丝生长的影响
测试结果(图7)表明，12 h光暗交替较连续光照和连续黑暗更有利于菌丝生长。
2．6 湿度对分生孢子萌发的影响
由图8可知，不同湿度对分生孢子萌发有明显的影响。相对湿度高于80％才能萌发，并随湿度增加，萌发率亦增加，在相对湿度100％和水滴下萌发率达到约95％。说明萌发需要高湿条件，水滴和相对湿度大、保持时间长更利于萌发。在RH80％～95％时，虽能萌发，但芽管较短，需要时间长。当RH95％以上，萌发速度快，产生芽管长，有菌丝状分支。
2．7 孢子的致死温度测定
试验结果表明：分生孢子的致死温度为55℃，10 min，经过50℃的处理仍有11％的萌发率，55℃及以上处理未见孢子萌发。
2．8 菌丝生长对杀菌剂敏感性测定
各供试药剂毒力回归式、斜率、EC50和相关系数(R)结果见表5。供试药剂按照EC50基本上可以归为2类：25％丙环唑乳油和25％咪鲜胺水乳剂，EC50分别为0.3061 ug/mL和0.450 2ug/mL，是供试药剂中EC50非常小的，说明这两种药剂抑菌效果好；6％戊唑醇微乳剂、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲环唑乳油，EC50在0.796 3～1.247ug/mL之间，说明这3种药剂抑菌效果较好。总体来看，5种供试药剂的EC50均较小，说明这些药剂对香蕉弯孢霉叶斑病菌均有很好的抑菌效果。回归方程的斜率与杀菌剂对病菌的敏感性成正比。按回归方程的斜率，供试药剂可以分为3类：6％戊唑醇微乳剂斜率值K为2.5627，是供试药剂中斜率最大的，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这种药剂的敏感性最高。25％咪鲜胺水乳剂、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲环唑乳油，斜率值在0.989 3～1.455之间，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这2种药剂的敏感性较高。25％丙环唑乳油斜率值K为0.7371，是供试药剂中斜率最小的，说明香蕉弯孢霉叶斑病菌对这种药剂的敏感性较低。
3 讨论
研究认为：①病原菌在不同培养基上菌丝生长，以PSA和PDA为好。②菌丝生长对温度的要求相对比较严格，最适温在25～30℃，亦利于产孢和分生孢子萌发。分生孢子萌发要求湿度较高，通常在RH80％以上才能萌发。RH≥98％或有水滴萌发最好，萌发率可达约95％。由此可见，香蕉弯孢霉叶斑病菌适宜于中温偏高和高湿环境，与在田间调查时病害发生发展温湿度一致。③不同的碳源和氮源對病原菌的生长影响较大，在有碳氮源与无碳氮源条件下菌落形态差异显著，碳源以蔗糖和葡萄糖为好，但病原菌对氮源的选择不很严格。④菌丝生长对pH适应的范围较宽，pH5～9均生长很好。分生孢子在pH5～9的酸碱环境中也均能萌发。光照对菌丝生长无显著促进作用。⑤分生孢子的致死温度为55℃(10 min)。⑥不同杀菌剂药物敏感性测定中EC50越小、斜率越大说明病原菌对药剂的反应灵敏度越高，即随着浓度的增加，抑菌率明显增大。在试验供试药剂中，EC5。低的药剂其毒力回归方程斜率值往往也较小。综合考虑供试药剂的EC50和斜率发现，25％咪鲜胺水乳剂和25％苯醚甲环唑乳油对香蕉弯孢霉叶斑病菌的抑菌效果好且敏感性高。室内的药物敏感性测定结果仅仅说明该杀菌剂在离体条件下对香蕉弯孢霉叶斑病菌的直接活性，田间的防治效果受到的影响因素很多，有待于试验进一步证实。