【摘 要】
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目的 对天花粉蛋白(TCS)进行定点突变、聚乙二醇(PEG)修饰,并将修饰前后TCS的诸多性质加以比较.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点YFF81-83进行定点突变,并将所构建的
【机 构】
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第四军医大学西京医院输血科,第四军医大学微生物学教研室
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目的 对天花粉蛋白(TCS)进行定点突变、聚乙二醇(PEG)修饰,并将修饰前后TCS的诸多性质加以比较.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点YFF81-83进行定点突变,并将所构建的突变体TCSYFF81-83ACS在大肠杆菌中表达及纯化.随后通过该突变体第82位刚引入的半胱氨酸残基进行PEG定点修饰.通过比较研究,分析所构建PEG修饰型TCS的DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质.结果 所构建的突变型TCS其活性与野生型TCS(wTCS)活性几乎相当,而免疫原性已显著降低.PEG修饰型TCS虽有活性下降,但其免疫原性比wTCS低(P＜0.05),急性毒性比wTCS低,LD50值约为wTCS的1.8倍(P＜0.05),血液内平均滞留时间和半衰期明显长于wTCS(P＜0.05).结论 通过基因工程及化学修饰方法改造TCS是可行的,所构建的突变型及PEG修饰型TCS值得进一步研究.
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