【摘 要】
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目的 通过对 2 0 40份样品的DNA测序 ,回顾性分析和研究DNA循环测序过程中一些影响因素及其序列图谱。方法 对测序中模板、引物、测序反应条件及其产物的纯化等因素进行比
【机 构】
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卫生部艾滋病预防与控制中心,卫生部艾滋病预防与控制中心,卫生部艾滋病预防与控制中心,卫生部艾滋病预防与控制中心
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目的 通过对 2 0 40份样品的DNA测序 ,回顾性分析和研究DNA循环测序过程中一些影响因素及其序列图谱。方法 对测序中模板、引物、测序反应条件及其产物的纯化等因素进行比较研究。结果 模板因素是测序成败的主要原因 ,占测序失败的 70 %。模板的质量直接影响着测序图谱 ,模板纯度不够 ,序列曲线表现为可读序列短 ,开始时波峰过高不易判读 ,然后峰值迅速降低 ,并有噪峰出现 ,信号减弱 ,在原始资料中核苷酸曲线的波峰扁平或者没有信号。模板浓度过高 ,序列曲线呈现头重脚轻 ,可读序列短 ;而浓度过低 ,则信号衰减。引物问题引起测序失败占 15 4% ,主要原因为引物失效 ,与模板匹配不完全 ,Tm值过低等因素。利用 75 %异丙醇沉淀纯化测序反应产物 ,效果好且简单 ,经济。结论 测序的质量与模板的纯度、浓度有着直接的关系 ,在大规模的测序中 ,推荐使用异丙醇沉淀法。
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