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目的
研究巨噬细胞RAW264.7在铁积累及脂质积累的环境中其铜蓝蛋白表达量的变化。
方法利用脂多糖(LPS)、柠檬酸铁铵(FAC)、去铁胺(DFO)及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理RAW264.7细胞，模拟炎症、铁过载及脂质过载的环境。利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR检测细胞铁代谢相关蛋白的表达水平，包括铁蛋白(Ft)、转铁蛋白受体(TfR)、铁排出蛋白(FPN1)及铜蓝蛋白(Cp)。利用胺氧化试验检测Cp的氧化活性。利用胆固醇酶法观察ox-LDL处理后RAW264.7细胞脂质过载的情况。
结果Western blot显示FAC处理细胞后，FPN1、Ft表达量显著上升，TfR表达量降低；LPS＋FAC处理细胞后，其Cp的mRNA水平提高(t＝–5.995, P＝0.019)，细胞表达的Cp活性显著提高(t＝–9.875, P＝0.001)。ox-LDL刺激细胞后，蛋白免疫印迹显示细胞Cp表达降低。LPS＋ox-LDL＋FAC处理后，RAW264.7细胞Cp的mRNA水平(t＝8.948, P＝0.001)、氧化功能(t＝6.663, P＝0.003)及蛋白水平较LPS＋FAC组有显著降低，且蛋白免疫印迹显示，LPS＋ox-LDL＋FAC组细胞Ft的表达量较LPS＋FAC组有升高。
结论RAW264.7细胞在炎症及铁过载的条件下，会出现Cp的高表达，提示Cp在RAW264.7细胞应对炎症及铁过载过程中发挥了较为重要的作用。脂质及铁负载的RAW264.7细胞其Cp的表达出现了显著的异常，且Cp的低表达会加重RAW264.7细胞的铁过载。