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摘 要：目的：对处方中黄柏和苦参两种药材合理利用及进一步提高治糜康栓的临床疗效。方法：采用L9（34）正交试验优化，取最优结果对其“提取次数”等因素再进行考察。结果：最佳工艺为加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小时，提取3次。
关键词：治糜康栓；盐酸小檗碱；正交试验；高效液相检测
治糜康栓是国家正式批准生产的纯中药制剂，收载与2015版《中华人民共和国药典》一部，具有清热解毒燥湿清热的功效，主要用于湿热下注所致的带下病，临床疗效确切，市场好。
处方的黄柏和苦参两味药物抗病原微生物的有效成分均为生物碱，其中黄柏以盐酸小檗碱为代表，苦参生物碱以苦参碱和氧化苦参碱为代表，而这些成分的脂溶性较好，在热水中的溶解性有限，而原工艺提取方法为水提，大大限制了临床治疗病原微生物感染的有效成分生物碱的提取，脂溶性有效成分有太多的浪费。基于对黄柏和苦参两种药材合理利用及进一步提高治糜灵栓的临床疗效的目的，我们在不改变原工艺处方、药物用量及原主要工艺的基础上，进行了工艺的优化，形成了一种简单、易行、适应于工业化大生产的生产工艺。
由于2015版药典将盐酸小檗碱作为含量测定的指标性成分，在尽量不改变原工艺和质量标准的情况下，我们以盐酸小檗碱为指标性成分，进行了工艺的筛选：
1 盐酸小檗碱的含量测定
1.1 仪器
仪器：安捷伦-高效液相色谱仪（LC-10ATvp泵，LC-10Avp检测器）。
色谱柱：Kromasil C18色谱柱（3.9mm×200mm，5μm）；Kromasil C18保护柱。
流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（33：67）。
流速：1.0ml/分钟。
检测波长：424nm。
1.2 对照品
盐酸小檗碱对照品：中国药品生物制品检定所，110713-200911，纯度为86.8%。
1.3 标准曲线制备
取盐酸小檗碱对照品9.378mg（按含盐酸小檗碱为86.8%计为8.14mg），精密称定，置5ml容量瓶用甲醇定容，取出40μl用甲醇定容到2ml。盐酸小檗碱对照品溶液分别自动进样4、7、10、13、16、20μl，测得盐酸小檗碱的峰面积，以质量X与色谱峰面积Y做标准曲线，得回归方程为：Y=25.475X-13.195（r=0.99995），结果见表1。
表明盐酸小檗碱在0.13～0.65μg范围内线性关系良好。
1.4 供试品溶液制备
取醇提物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，称定重量，置50℃水浴中加热使充分溶散，取出，放冷，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置过夜，取出，取上清液迅速滤过，精密吸取滤液2ml加在碱性氧化铝柱（100-200目，12g内径为1cm）上，加甲醇35ml洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖匀，滤过，取续滤液，经0.45um微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
1.5 测定法
分别精密吸取对照品溶液10μl，供试品溶液10μl入高效液相色谱仪，测定并计算样品中盐酸小檗碱的含量。
2 乙醇浓度、用量、提取时间考察
乙醇浓度、用量、提取时间及提取次数是影响回流提取的主要因素，因此对乙醇浓度、用量、提取时间进行L9（34）正交试验优化，取最优结果对其“提取次数”因素再进行考察见表2。
试验方法：黄柏、苦参各200g加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，药渣按表2加入不同浓度不同倍数的乙醇煎煮，按煎煮时间和次数进行提取，滤过，合并滤液，回收乙醇，干燥，测出膏率和干膏中盐酸小檗碱的量，结果见表3、4。
F1-0.1（2，2）=9.00；F1-0.05（2，2）=19.00； F1-0.01（2，2）=99.00
分析：由表中结果可知，醇回流提取正交试验中的四个因素，乙醇浓度（%）、溶媒体积（v）、提取时间（h）及提取次数中，溶媒体积对小檗碱含量影响较大，溶媒体积F值小于0.05，有差异性。对结果进行分析，四因素对小檗碱含量影响大小为B>D>A>C，其中D、A、C三因素对小檗碱含量影响不大。
因此确定最佳工艺为A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小时，提取3次。
最佳工艺验证：
取提取物粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，称定重量，置50？C水浴中加热使充分溶散，取出，放冷，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置过夜，取出，取上清液迅速滤过，精密吸取滤液10ml加在，碱性氧化铝柱（100-200目，12g内径为1cm）上，加甲醇35ml洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl，供试品溶液5-10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果见表5。
从实验结果可以看出，所确定的正交实验的结果重现性良好，可以最后确定最佳工艺为A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小时，提取3次。
3 讨论
3.1 将苦参、黄柏药渣中的有效成分充分提取后进行制剂，提高了有效成分的转移率，充分利用药材。
3.2 有效成分的提取率增高，抗病原微生物的药理活性显著增加。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1118.
关键词：治糜康栓；盐酸小檗碱；正交试验；高效液相检测
治糜康栓是国家正式批准生产的纯中药制剂，收载与2015版《中华人民共和国药典》一部，具有清热解毒燥湿清热的功效，主要用于湿热下注所致的带下病，临床疗效确切，市场好。
处方的黄柏和苦参两味药物抗病原微生物的有效成分均为生物碱，其中黄柏以盐酸小檗碱为代表，苦参生物碱以苦参碱和氧化苦参碱为代表，而这些成分的脂溶性较好，在热水中的溶解性有限，而原工艺提取方法为水提，大大限制了临床治疗病原微生物感染的有效成分生物碱的提取，脂溶性有效成分有太多的浪费。基于对黄柏和苦参两种药材合理利用及进一步提高治糜灵栓的临床疗效的目的，我们在不改变原工艺处方、药物用量及原主要工艺的基础上，进行了工艺的优化，形成了一种简单、易行、适应于工业化大生产的生产工艺。
由于2015版药典将盐酸小檗碱作为含量测定的指标性成分，在尽量不改变原工艺和质量标准的情况下，我们以盐酸小檗碱为指标性成分，进行了工艺的筛选：
1 盐酸小檗碱的含量测定
1.1 仪器
仪器：安捷伦-高效液相色谱仪（LC-10ATvp泵，LC-10Avp检测器）。
色谱柱：Kromasil C18色谱柱（3.9mm×200mm，5μm）；Kromasil C18保护柱。
流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（33：67）。
流速：1.0ml/分钟。
检测波长：424nm。
1.2 对照品
盐酸小檗碱对照品：中国药品生物制品检定所，110713-200911，纯度为86.8%。
1.3 标准曲线制备
取盐酸小檗碱对照品9.378mg（按含盐酸小檗碱为86.8%计为8.14mg），精密称定，置5ml容量瓶用甲醇定容，取出40μl用甲醇定容到2ml。盐酸小檗碱对照品溶液分别自动进样4、7、10、13、16、20μl，测得盐酸小檗碱的峰面积，以质量X与色谱峰面积Y做标准曲线，得回归方程为：Y=25.475X-13.195（r=0.99995），结果见表1。
表明盐酸小檗碱在0.13～0.65μg范围内线性关系良好。
1.4 供试品溶液制备
取醇提物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，称定重量，置50℃水浴中加热使充分溶散，取出，放冷，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置过夜，取出，取上清液迅速滤过，精密吸取滤液2ml加在碱性氧化铝柱（100-200目，12g内径为1cm）上，加甲醇35ml洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖匀，滤过，取续滤液，经0.45um微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
1.5 测定法
分别精密吸取对照品溶液10μl，供试品溶液10μl入高效液相色谱仪，测定并计算样品中盐酸小檗碱的含量。
2 乙醇浓度、用量、提取时间考察
乙醇浓度、用量、提取时间及提取次数是影响回流提取的主要因素，因此对乙醇浓度、用量、提取时间进行L9（34）正交试验优化，取最优结果对其“提取次数”因素再进行考察见表2。
试验方法：黄柏、苦参各200g加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，药渣按表2加入不同浓度不同倍数的乙醇煎煮，按煎煮时间和次数进行提取，滤过，合并滤液，回收乙醇，干燥，测出膏率和干膏中盐酸小檗碱的量，结果见表3、4。
F1-0.1（2，2）=9.00；F1-0.05（2，2）=19.00； F1-0.01（2，2）=99.00
分析：由表中结果可知，醇回流提取正交试验中的四个因素，乙醇浓度（%）、溶媒体积（v）、提取时间（h）及提取次数中，溶媒体积对小檗碱含量影响较大，溶媒体积F值小于0.05，有差异性。对结果进行分析，四因素对小檗碱含量影响大小为B>D>A>C，其中D、A、C三因素对小檗碱含量影响不大。
因此确定最佳工艺为A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小时，提取3次。
最佳工艺验证：
取提取物粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，称定重量，置50？C水浴中加热使充分溶散，取出，放冷，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置过夜，取出，取上清液迅速滤过，精密吸取滤液10ml加在，碱性氧化铝柱（100-200目，12g内径为1cm）上，加甲醇35ml洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl，供试品溶液5-10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果见表5。
从实验结果可以看出，所确定的正交实验的结果重现性良好，可以最后确定最佳工艺为A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小时，提取3次。
3 讨论
3.1 将苦参、黄柏药渣中的有效成分充分提取后进行制剂，提高了有效成分的转移率，充分利用药材。
3.2 有效成分的提取率增高，抗病原微生物的药理活性显著增加。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1118.