【摘 要】
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根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列，设计并合成3对引物，将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定，体外转录出RNA，系列稀释作为阳性标准品，用于标准曲线的绘制
【机 构】
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南京农业大学动物医学院,聊城大学农学院,农业部动物检疫所
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(30430420,39770569,30170682);中德农业科技合作项目
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根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列，设计并合成3对引物，将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定，体外转录出RNA，系列稀释作为阳性标准品，用于标准曲线的绘制和样品检测，并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化，建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台，并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测。结果证明，建立的一步法荧光定量RT—PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量，可用于猪矗驴。、hsp。和GAPDH基因mRNA水平的检测。
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