研究红景天苷对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其机制。
方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为6组,分别为正常血糖组(5.5 mmol/L葡萄糖进行干预)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖进行干预)、红景天苷10 μg/ml组(10 μg/ml红景天苷+33 mmol/L葡萄糖进行干预)、红景天苷4 μg/ml组(4 μg/ml红景天苷+33 mmol/L葡萄糖进行干预)、红景天苷1 μg/ml组(1 μg/ml红景天苷+33 mmol/L葡萄糖进行干预)、红景天苷0.1 μg/ml组(红景天苷0.1 μg/ml+33 mmol/L葡萄糖进行干预)。各组HUVEC培养48 h后,MTT法检测其细胞存活率,分别使用丙二醛(MDA)检测试剂盒及一氧化氮(NO)检测试剂盒检测细胞内MDA、NO浓度,Western blot法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶–3(caspase–3)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白激酶δ(CAMKⅡδ)、总内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白表达水平,以及检测eNOS ser1177位点的磷酸化水平,并使用流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度和活性氧(ROS)的水平。
结果细胞培养后48 h,高糖组HUVEC存活率显著低于正常血糖组(P<0.05),细胞NO含量少于正常血糖组(P<0.05),MDA、ROS及活性caspase–3的表达水平均显著高于正常血糖组(P均<0.05),细胞内Ca2+浓度显著低于正常血糖组(P<0.05),CaM、CAMKⅡδ、总eNOS的表达水平均显著低于正常血糖组(P均<0.05),eNOS ser1177位点的磷酸化水平亦显著低于正常血糖组(P<0.05)。红景天苷10 μg/ml组细胞存活率显著高于高糖组(P<0.05),细胞内NO含量显著高于高糖组(P<0.05),细胞内MDA、ROS及活性caspase–3的表达水平均显著低于高糖组(P均<0.05),细胞内Ca2+浓度显著高于高糖组(P<0.05),CaM、CAMKⅡδ和总eNOS的表达水平均显著高于高糖组(P均<0.05),eNOS ser1177位点的磷酸化水平亦显著高于高糖组(P<0.05)。
结论红景天苷对高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Ca2+/CaM/CAMKⅡδ/eNOS信号通路有关。