【摘 要】
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以碳霉素４″异戊酰基转移酶基因（ｃａｒＥ）为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中，经菌落杂交获得阳性菌落ｐｃＮ１０Ｆ５。经分子杂交证明ｐｃＮ１０Ｆ５ＤＮＡ的ＢａｍＨ１－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段与ＣａｒＥ基因同源。将ｐＣＮ１０Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨ１８．０ｋｂ片段分别克隆到ｐＩＪ６８０、ｐＷＨＭ３、ｐＷＨＭ６０１质粒载体上，获得重组质粒ｐ６Ｆｓ、
【机 构】
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中国医学科学院医药生物技术研究所;
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以碳霉素４″异戊酰基转移酶基因（ｃａｒＥ）为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中，经菌落杂交获得阳性菌落ｐｃＮ１０Ｆ５。经分子杂交证明ｐｃＮ１０Ｆ５ＤＮＡ的ＢａｍＨ１－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段与ＣａｒＥ基因同源。将ｐＣＮ１０Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨ１８．０ｋｂ片段分别克隆到ｐＩＪ６８０、ｐＷＨＭ３、ｐＷＨＭ６０１质粒载体上，获得重组质粒ｐ６Ｆｓ、ｐｗＦ５和ＰＧＦ５。含上述重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株均产生与丙酰螺旋霉素相类似的产物，且以ｐＩＪ６８０为载体的克隆菌株产生丙酰螺旋霉素的比例最高，最稳定。含ｐ６Ｆ５克隆菌株的发酵产物经提取、纯化后，进行理化性质及各种光谱数据的分析，证明其主要产物为丙酰螺旋霉素Ⅲ及Ⅱ。分子杂交实验证明螺旋霉素产生菌克隆菌株中，确实含有ｐ６Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段。经分子杂交、亚克隆及基因表达实验，将麦迪霉素４″羟基丙酰基转移酶基因，定位于ＥｃｏＲＩ－ＥｃｏＲＩ－ｐｓｔＩ的２．６ｓｋｂ片段上。核昔酸序列分析结果显示该基因由１１６４个核昔酸组成，Ｇ＋Ｃ％为７０．ｏ％，ＳＤ序列为ＧＡＧＧＴ，起始密码为ＡＴＧ，终止密码为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸残基，蛋白的分子量为４２．?
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