标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

来源 :植物研究 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ding_zh

【摘要】

：

构建含有HPT的原核表达质粒,经诱导表达纯化后获得HPT抗体。从含有hpt的质粒pCambia1301上扩增目的基因,经SalⅠ和NotⅠ双酶切后与原核表达载体pET-28b（＋）进行粘性末端连接,成功

【作者】

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高彬张海燕范海

【机构】

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山东师范大学逆境植物重点实验室,中国科学院植物研究所

【出处】

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植物研究

【发表日期】

：

2011年1期

【关键词】

：

潮霉素磷酸转移酶原核表达重组蛋白多克隆抗体 hygromycin-B-phosphotransferas prokaryotic expression r

【基金项目】

：

国家“863”计划（2007AA091701）

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构建含有HPT的原核表达质粒,经诱导表达纯化后获得HPT抗体。从含有hpt的质粒pCambia1301上扩增目的基因,经SalⅠ和NotⅠ双酶切后与原核表达载体pET-28b（＋）进行粘性末端连接,成功构建了pET-28b-hpt质粒,并转化到宿主细菌大肠杆菌Rosset（DE3）中进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下,pET-28b-hpt原核表达载体在E.coli Rosset菌株中以包涵体的形式高效表达了HPT蛋白,并以纯化的目的蛋白为抗原免疫兔制备了多克隆抗体。利用本方法

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