人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化

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淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL-2Ra基因的诱导表达控制,而IL-2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件(-391TCATCCCAGG-381,NRE)及其下游不完全反转重复序列(-153CCTGGTTTGA-143NIRS)。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明,纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争,提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控,而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。 The appearance of high affinity IL-2R on the surface of lymphocytes is controlled by the induced expression of IL-2Ra gene, while the expression of IL-2Ra chain gene is strictly controlled by space-time. Negative regulatory elements (-391TCATCCCAGG-381, NRE) and its downstream incomplete inverted repeat (-153CCTGGTTTGA-143NIRS) exist in addition to the positive regulatory elements upstream of the IL-2Ra gene. This group has been through UV crosslinking experiments found Jurkat cells have a protein and NIRS and NRE specific binding. In this paper, a NRE-specific binding protein with a molecular weight of about 75 kD was obtained from heparinized 1010 Jurkat cells by heparin-affinity column chromatography and sequence-specific DNA affinity chromatography. EMSA experiments showed that the purified protein and NRE formed by the combination of NIRS and HIVLTR negative regulatory elements compete, suggesting that the NRE-binding protein may not only be involved in the transcriptional regulation of IL-2Ra gene, and may be HIV gene expression process Play a role.
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