论文部分内容阅读
目的:观察益气健脾化瘀方协同5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对615小鼠胃癌生长的抑制作用,并通过肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）极化方向,探讨其可能的作用机制。方法:40只615小鼠随机分为正常组,益气健脾化瘀方(25 g·kg-1)组,5-FU(25 mg·kg-1)组,联合(益气健脾化瘀方25 g·kg-1+5-FU 25 mg·kg-1)组,每组10只。腋下接种MFC胃癌细胞建立小鼠胃癌移植瘤模型。苏木素-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）染色法观察各组小鼠肿瘤病理的改变;流式细胞仪测定肿瘤组织中M1,M2型TAMs含量;免疫组化观察腋下移植瘤中CD206的表达;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测瘤组织中TAMs相关基因白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）,白细胞介素-12（interleukin-12,IL-12）,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）,精氨酸酶1（arginase-1,Arg1）,几丁质酶3蛋白3（chitinase 3-like 3,Ym1）的mRNA表达水平。Real-time PCR,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测瘤组织中上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）相关上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）,神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）,锌指转录因子Slug,Snail,波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白的表达。结果:各组小鼠胃癌细胞排列呈巢状及片状,细胞间质见促纤维结缔组织反应及少量炎症细胞浸润。各药物组可见明显肿瘤凝固性坏死,残留肿瘤细胞量正常组>益气健脾化瘀方组>5-FU组>联合组。免疫组化表明,各给药组均能减少瘤体CD206的表达,以联合组最明显。流式细胞仪检测证实,与正常组比较,各给药组均能减少M2型TAMs的含量（P<0.05,P<0.01）,联合组减少M2型TAMs的含量最明显;益气健脾化瘀方组、联合组均能增加M1型TAMs的含量（P<0.05,P<0.01）,以益气健脾化瘀方组最为明显。与正常组比较,益气健脾化瘀方组、联合组均能下调Arg1,Ym1 mRNA,上调IL-1β,TNF-α,IL-12 mRNA表达（P<0.05）。与5-FU组比较,联合组能明显升高IL-1β,IL-12,TNF-αmRNA,下调Arg1,Ym1 mRNA表达（P<0.05）。与正常组比较,益气健脾化瘀方组能上调E-cadherin mRNA及蛋白表达（P<0.05）,下调N-cadherin,Vimentin mRNA表达（P<0.05）;联合组能上调E-cadherin,下调N-cadherin,Slug,Snail,Vimentin mRNA表达（P<0.05）,上调E-cadherin,下调N-cadherin,Slug蛋白表达（P<0.01）。与5-FU组比较,联合组能上调肿瘤组织中E-cadherin,下调N-cadherin,Slug,Vimentin mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论:益气健脾化瘀方对胃癌生长有一定的抑制作用,与5-FU联用有较好的协同抑制胃癌生长、改善胃癌上皮间质转化,机制可能与促进胃癌中TAMs从M2表型向M1表型转化有关。