【摘 要】
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目的 探讨骨桥蛋白(OPN)下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响.方法 参考相关文献,设计并合成OPN的小干扰RNA(siRNA),通过荧光标记测定2株细胞的转染效率.Western
【机 构】
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复旦大学附属中山医院肿瘤科,复旦大学附属中山医院消化科
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目的 探讨骨桥蛋白(OPN)下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响.方法 参考相关文献,设计并合成OPN的小干扰RNA(siRNA),通过荧光标记测定2株细胞的转染效率.Western印迹法检测OPN蛋白下调情况.实时定量聚合酶链反应(R-PCR)检测siRNA对OPN mRNA的下调率及随时间的变化.流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法连续7 d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化,并采用混合模型进行统计分析.Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析.结果 2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90%以上.干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调.SGC7901细胞在siRNA转染后72 h OPN mRNA表达下降最低,达47%;MKN28细胞在siRNA转染后48 h OPN mRNA表达下降最低,达40%.OPN被干扰后,SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱(混合模型分析与未干扰组比较,P＜0.01). OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响,其中SGC7901分裂期细胞比例由18.78%降至17.02%,MKN28分裂期细胞比例则由4.96%降至0.39%.2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡.OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降,穿过人工基底膜的细胞数明显减少(SGC7901:t=5.172,P＜0.01;MKN28:t=11.365,P＜0.01).结论 siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达,OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关.
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