目的建立同时定量检测己二酰肼（adipic acid dihydrazide,ADH）和N-（3-二甲基氨基丙基）-N′-乙基碳二亚胺[N-（3-dimethylaminopropyl）-N′-ethylcarbodimide,EDAC]的液相色谱串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）法,实现多糖蛋白结合物（肺炎球菌结合物、脑膜炎球菌结合物和b型流感嗜血杆菌结合物）中残留ADH和EDAC的定量研究。方法通过检测EDAC在纯水、中性水溶液[（50 mmol/L磷酸缓冲溶液（pH 6.8）、200 mmol/L氯化钠水溶液和疫苗培养基）]及0.1%甲酸（formic acid,FA）水溶液中的稳定性,确定实现EDAC完全转换为EDU的前处理条件。优化了色谱柱种类对ADH、EDU和EDAC的保留,以及质谱条件如产物离子、碰撞电压、Q1和Q3电压等对ADH和EDU定量灵敏度的影响,建立以C18WCX（2.1 mm×150 mm,5μm）为固定相,pH 2～3的0.1%FA-水和0.1%FA-乙腈为流动相的LC-MS/MS方法,实现ADH和EDAC（实际检测对象为EDAC的转换产物EDU）的高灵敏度定量分析。对建立方法的精密度、准确度、线性范围、检出限（LOD）和定量限（LOQ）进行验证。结果 ADH在水溶液中较稳定,EDAC自溶解开始即水解为EDU,且难以完全转换,导致EDAC测定困难;在样品和标准品溶液中加入FA,可实现EDAC完全且快速的转换为EDU。ADH、EDU和EDAC在C18色谱柱上保留弱,在色谱柱的死时间附近出峰,无法实现这些化合物与样品基质的分离,而本文所选C18WCX固定相可实现目标化合物的保留且峰形较好。通过前体离子扫描、产物离子扫描,选择目标化合物的前体离子和响应强度较好的产物离子作为MRM的离子对,并用MRM自动优化程序获得目标化合物的最佳Q1、CE和Q3电压值。建立的方法检测的ADH和EDAC含量与峰面积线性关系良好,R2均大于0.999;ADH的LOD为3.96μg/L、LOQ为15.63μg/L,EDAC的LOD为0.58μg/L、LOQ为1.17μg/L,灵敏度较高;精密度（峰面积RSD ＜2%）及准确度（回收率为90%～105%）较高。结论建立的LC-MS/MS方法实现了多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC（通过测定EDU定量EDAC）的高灵敏度检测,与《中国药典》三部（2015版）方法相比,该方法预处理更简单,自动化程度更高且灵敏度更好,适合于多种多糖蛋白结合物中ADH和EDAC残留的检测。