分光光度法研究EDTA对小牛肠碱性磷酸酶的不可逆抑制动力学

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运用邹氏酶活性不可逆改变动力学,在不同酶底物浓度及不同抑制剂浓度下,用分光光度法监测酶底物水解产物浓度随时间变化的过程,研究了抑制剂EDTA对小牛肠碱性磷酸酶活性的不可逆抑制作用.结果表明:EDTA对小牛肠碱性磷酸酶抑制反应机理为:EDTA与小牛肠碱性磷酸酶发生络合作用,形成中间态的酶-EDTA络合物,此络合物的形成,导致该酶活性中心微环境构象发生变化,使酶的催化活性丧失,随后EDTA将酶中金属离子拉出,使酶发生不可逆失活.实验测定了37℃下EDTA对小牛肠碱性磷酸酶不可逆抑制作用的微观速率常数ki为0.
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