【摘 要】
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提取ConcavadinA诱导培养的犬脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出犬IFN-γ基因,克隆到pMD18-T载体并测序鉴定,然后把IFN-γ基因克隆到原核表达载体PJLA605,构建pRL-CaIFN-γ表达质粒
【机 构】
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东北农业大学动物医学系,黑龙江生物技术职业学院
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提取ConcavadinA诱导培养的犬脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出犬IFN-γ基因,克隆到pMD18-T载体并测序鉴定,然后把IFN-γ基因克隆到原核表达载体PJLA605,构建pRL-CaIFN-γ表达质粒;应用M9培养基通过摇瓶发酵,确定诱导时机和诱导表达时间.结果表明,工程菌pRL-CaIFN-γ在30℃培养至OD600为1.5于42℃诱导4 h,菌体收获量湿重达20.0g/L,目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的32%,外源基因在该基因工程菌中得到了高效表达.
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