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摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定盐酸氨溴索有关物质的方法。方法 采用Welchrom-C18（5μm，4.6*250mm）色谱柱，流动相为0.01mol/L磷酸氢二铵溶液（用磷酸调pH值至7.0）-乙腈（50：50），检测波长248nm，流速为1.0ml/min，进样量为20μl。结果 在该色谱条件下，盐酸氨溴索与各杂质分离良好。结论 该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于有关物质的检测。
关键词：盐酸氨溴索 有关物质 高效液相色谱法
盐酸氨溴索（Ambroxol Hydrochloride）为溴己新的活性代谢产物，能促进肺表面活性物质的分泌及肺道液体分泌，促进痰液溶解，显著降低痰粘度，增加支气管粘膜纤毛运动，促进粘液排出。主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液粘稠、咳痰困难等。中国药典[1]中未对本品的已知杂质进行控制，为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（HPLC）法，参考有关文献[2-3]对盐酸氨溴索中有关物质进行了检测，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于有关物质的检测。
一、仪器与试药
1.仪器
高效液相色谱仪（岛津LC-20ATvp泵，SPD-20Avp紫外检测器），UV2450紫外-可见分光光度计。
2.样品及试药
盐酸氨溴索对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100599-201203，含量：100.0%）；盐酸氨溴索（山东方明药业集团股份有限公司，批号：120901、120902、120903）；盐酸氨溴索杂质B（反式-4-（6，8-二溴-1，4二氢喹唑啉-3（2H）-基）环己醇）、杂质C（反式-4-[[（E）-2-氨基-3，5-二溴苄基]氨基] 环己醇）、杂质D（顺式-4-[（2-氨基-3，5二溴苄）氨基] 环己醇）、杂质E（2-氨基-3，5-二溴苯甲醛）均为山东方明药业集团股份有限公司自制；乙腈、磷酸为色谱纯；磷酸氢二铵为分析纯；水为纯化水。
二、方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为Welchrom-C18柱（5μm，4.6*250mm），流动相为0.01mol/L磷酸氢二铵溶液（用磷酸调pH值至7.0）-乙腈（50：50），检测波长为248nm，进样量为20μl。
2.溶液的配制
2.1供试品溶液
取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2对照溶液
精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3杂质对照品溶液
精密称取盐酸氨溴索杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml各约含1μg的溶液，即得。
三、方法学研究
1.专属性试验
破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、加热、光照破坏后，按“1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品经酸、碱、氧化、热、光照破坏试验，降解产物均能检出，且与主成分峰能达到良好分离。峰纯度检查符合规定，说明本色谱条件专属性良好。
2.线性范围
精密称取盐酸氨溴索对照品10.12mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液1、2.5、4、5、6、7.5ml置50ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。照“1”项下色谱条件测定，结果盐酸氨溴索在2.024μg/ml～15.18μg/ml范围内，回归方程为Y=32811X+459，（r=0.9997，n=6），盐酸氨溴索浓度与峰面积线性良好。
3.精密度试验
取线性项下贮备液5ml，置于50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。溶液重复测定6次，结果峰面积RSD为1.1%。结果表明本方法的精密度良好。
4.定量限
信噪比约为10：1，得盐酸氨溴索的定量限为0.2ng，杂质B的定量限为0.6ng，杂质C的定量限为0.8ng，杂质D的定量限为0.6ng，杂质E的定量限为0.4ng。
5.检测限
信噪比约为3：1，得盐酸氨溴索的检测限为0.061ng，杂质B的检测限为0.2ng，杂质C的检测限为0.25ng，杂质D的检测限为0.2ng，杂质E的检测限为0.12ng。
6.稳定性
取盐酸氨溴索杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1μg的混合溶液，摇匀，在室温（25℃）条件下，分别于0、2、4、6、8小时，照“1”项下色谱条件测定，结果杂质C溶液变化比较大，故杂质C对照品溶液需临用新配。
7.样品测定
按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液及杂质对照品溶液，照“1”项下色谱条件，进行测定，杂质B、C、D、E按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算，结果三批样品中杂质B分别为0.015%、0.014%、0.015%，杂质C、D、E均未检出，总杂质分别为0.016%、0.017%、0.018%。
四、讨论
本实验对HPLC法测定盐酸氨溴索有关物质的方法学进行了研究，结果盐酸氨溴索分别在酸、碱、氧化、光照及加热条件中进行强制破坏，各降解产物均能检出，且与主成分峰能达到良好分离。试验结果表明杂质C溶液稳定性较差，杂质C对照品溶液及样品溶液应临用新配。 本方法用于测定盐酸氨溴索的有关物质，专属性强、灵敏度高、重复性好，结果准确可靠。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：765-766.
[2] 付建，苏贵勇，赵海桥.HPLC法测定盐酸氨溴索注射液的含量和有关物质[J].齐鲁药事，2012，31（2）：84-87.
[3] EUROPEAN PHARMACOPOEIA 7.0[S] European Directorate for Quality Medicines， Ambroxol Hydrochloride：1365-1366.
关键词：盐酸氨溴索 有关物质 高效液相色谱法
盐酸氨溴索（Ambroxol Hydrochloride）为溴己新的活性代谢产物，能促进肺表面活性物质的分泌及肺道液体分泌，促进痰液溶解，显著降低痰粘度，增加支气管粘膜纤毛运动，促进粘液排出。主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液粘稠、咳痰困难等。中国药典[1]中未对本品的已知杂质进行控制，为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（HPLC）法，参考有关文献[2-3]对盐酸氨溴索中有关物质进行了检测，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于有关物质的检测。
一、仪器与试药
1.仪器
高效液相色谱仪（岛津LC-20ATvp泵，SPD-20Avp紫外检测器），UV2450紫外-可见分光光度计。
2.样品及试药
盐酸氨溴索对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100599-201203，含量：100.0%）；盐酸氨溴索（山东方明药业集团股份有限公司，批号：120901、120902、120903）；盐酸氨溴索杂质B（反式-4-（6，8-二溴-1，4二氢喹唑啉-3（2H）-基）环己醇）、杂质C（反式-4-[[（E）-2-氨基-3，5-二溴苄基]氨基] 环己醇）、杂质D（顺式-4-[（2-氨基-3，5二溴苄）氨基] 环己醇）、杂质E（2-氨基-3，5-二溴苯甲醛）均为山东方明药业集团股份有限公司自制；乙腈、磷酸为色谱纯；磷酸氢二铵为分析纯；水为纯化水。
二、方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为Welchrom-C18柱（5μm，4.6*250mm），流动相为0.01mol/L磷酸氢二铵溶液（用磷酸调pH值至7.0）-乙腈（50：50），检测波长为248nm，进样量为20μl。
2.溶液的配制
2.1供试品溶液
取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2对照溶液
精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3杂质对照品溶液
精密称取盐酸氨溴索杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml各约含1μg的溶液，即得。
三、方法学研究
1.专属性试验
破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、加热、光照破坏后，按“1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品经酸、碱、氧化、热、光照破坏试验，降解产物均能检出，且与主成分峰能达到良好分离。峰纯度检查符合规定，说明本色谱条件专属性良好。
2.线性范围
精密称取盐酸氨溴索对照品10.12mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液1、2.5、4、5、6、7.5ml置50ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。照“1”项下色谱条件测定，结果盐酸氨溴索在2.024μg/ml～15.18μg/ml范围内，回归方程为Y=32811X+459，（r=0.9997，n=6），盐酸氨溴索浓度与峰面积线性良好。
3.精密度试验
取线性项下贮备液5ml，置于50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。溶液重复测定6次，结果峰面积RSD为1.1%。结果表明本方法的精密度良好。
4.定量限
信噪比约为10：1，得盐酸氨溴索的定量限为0.2ng，杂质B的定量限为0.6ng，杂质C的定量限为0.8ng，杂质D的定量限为0.6ng，杂质E的定量限为0.4ng。
5.检测限
信噪比约为3：1，得盐酸氨溴索的检测限为0.061ng，杂质B的检测限为0.2ng，杂质C的检测限为0.25ng，杂质D的检测限为0.2ng，杂质E的检测限为0.12ng。
6.稳定性
取盐酸氨溴索杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1μg的混合溶液，摇匀，在室温（25℃）条件下，分别于0、2、4、6、8小时，照“1”项下色谱条件测定，结果杂质C溶液变化比较大，故杂质C对照品溶液需临用新配。
7.样品测定
按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液及杂质对照品溶液，照“1”项下色谱条件，进行测定，杂质B、C、D、E按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算，结果三批样品中杂质B分别为0.015%、0.014%、0.015%，杂质C、D、E均未检出，总杂质分别为0.016%、0.017%、0.018%。
四、讨论
本实验对HPLC法测定盐酸氨溴索有关物质的方法学进行了研究，结果盐酸氨溴索分别在酸、碱、氧化、光照及加热条件中进行强制破坏，各降解产物均能检出，且与主成分峰能达到良好分离。试验结果表明杂质C溶液稳定性较差，杂质C对照品溶液及样品溶液应临用新配。 本方法用于测定盐酸氨溴索的有关物质，专属性强、灵敏度高、重复性好，结果准确可靠。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：765-766.
[2] 付建，苏贵勇，赵海桥.HPLC法测定盐酸氨溴索注射液的含量和有关物质[J].齐鲁药事，2012，31（2）：84-87.
[3] EUROPEAN PHARMACOPOEIA 7.0[S] European Directorate for Quality Medicines， Ambroxol Hydrochloride：1365-1366.