【摘 要】
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目的:对影响金钗石斛ISSR-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础。方法:通过筛选引物并设定影响金钗石斛ISSR反应诸因子的不同浓度,检测ISSR不同
【机 构】
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上海中医药大学中药研究所,上海中药标准化研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30472150);中国APEC科技产业合作基金资助项目;上海市重点学科建设基金资助项目(Y0301)
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目的:对影响金钗石斛ISSR-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础。方法:通过筛选引物并设定影响金钗石斛ISSR反应诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立金钗石斛ISSR稳定可靠的反应体系。结果:金钗石斛较适宜的ISSR-PCR反应条件为:10 lμPCR反应体系,含5～15 ng模板DNA、2.0 mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.6～0.75 U Taq DNA聚合酶、1.0μmol/L引物。较适宜的退火温度为46～62℃。结论:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度等对ISSR反应结果具有较大影响。所建立的金钗石斛ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可用于金钗石斛的遗传多样性研究。
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