论文部分内容阅读
目的
利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株，初步探讨ampG基因缺失对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响。
方法PCR分别扩增实验菌株ampG上下游同源臂片段，再利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR，SOE-PCR)技术获得ampG基因上下游同源臂融合片段，酶切后克隆至温敏性自杀载体pKO3-km上，构建pKO3-km-ΔampG重组质粒，电转化至肺炎克雷伯菌Kp1和Kp NTUH-K2044菌株中，通过同源重组技术，利用pKO3-km的温敏特点，筛选出肺炎克雷伯菌ampG基因缺失的突变株；将克隆质粒pACYC184-ampCR分别导入Kp NTUH-K2044的野生型及其ampG基因缺失菌株中，使其获得AmpC酶基因；采用纸片扩散法，以头孢西丁为诱导剂，观察ampG基因缺失前后对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响。
结果成功构建pKO3-km-ΔampG重组质粒，经PCR及DNA测序证实获得肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株，与野生型相比，Kp1菌株ampG基因敲除后AmpC酶诱导表型消失，而在获得了外源性AmpC酶基因后，Kp NTUH-K2044菌株AmpC酶诱导表型阳性，其相应的ampG基因缺失株AmpC酶诱导表型阴性。
结论成功构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株，ampG基因缺失后肺炎克雷伯菌AmpC酶不能诱导表达。