【摘 要】
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目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达。方法:首先提取曼地亚
【机 构】
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华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所; 华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(NSFC20776058);2006年教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0646)
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目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达。方法:首先提取曼地亚红豆杉细胞的总RNA,反转录获得其sscDNA,并以其为模板扩增BAPT酶的基因,然后将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a(+)-BAPT,并将重组质粒转入E.coliBL21宿主中诱导表达。结果:扩增获得1338bp的BAPT基因序列,成功构建了原核表达质粒pET32a(+)-BAPT,并在E.coliBL21中实现高效表达。结论:BAPT基因表达产物的分子量约为51kDa,与预期大小一致。该研究为进一步分析曼地亚红豆杉BAPT酶的酶学特性奠定了基础。
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