内参基因β-actin质粒标准品的构建

来源 :中国组织工程研究与临床康复 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wintertear0704
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为构建检测内参基因β-actinmRNA表达水平差异的标准品,以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random6mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人β—actin基因相应的cDNA片段,构建PMD-18-β-actin重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好,构建的β—actin质粒经PCR扩增后得到-186bD的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.39×10^13copies/mL,倍比稀释至2.0
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