【摘 要】
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目的 建立一种快速、简便的诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价.方法 克隆、表达恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ基因,以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,筛选恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ特异的单克隆抗体,分别作为包被抗体和标记抗体,制备免疫层析试条.用该试条检测流行区非疟疾发热患者血样80份、内脏利什曼病患者血样20份和确诊的间日疟患者血样75份以评价其特异性；检测确诊的恶性疟患者血样
【机 构】
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200025上海,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心,200025上海,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,
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目的 建立一种快速、简便的诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价.方法 克隆、表达恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ基因,以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,筛选恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ特异的单克隆抗体,分别作为包被抗体和标记抗体,制备免疫层析试条.用该试条检测流行区非疟疾发热患者血样80份、内脏利什曼病患者血样20份和确诊的间日疟患者血样75份以评价其特异性；检测确诊的恶性疟患者血样89份,以评价其敏感性. 结果 成功克隆并表达了恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ,用重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,采用杂交瘤技术共筛选出5株能高效分泌特异抗体的细胞株(效价为1:12 800～1:102 400),抗体亚类均为IgG1.所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白组分,而与疫区非疟疾发热患者的红细胞组分无交叉反应.以筛选到的单克隆抗体制备的免疫层析试条检测疫区非疟疾发热患者、内脏利什曼病患者和间日疟患者血样的特异度为97.7％(171/175),其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测恶性疟患者血样敏感度为95.5％(85/89). 结论 制备了能识别天然恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的特异性单克隆抗体,以此单抗为基础研制出的快速诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条敏感度、特异度均较高。
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