【摘 要】
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【目的】观察脂多糖(LPS)对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用。【方法】体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯LPS刺激组、LPS+P38
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院妇产科,中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广东广州510120,广州医学院附属第五医院泌尿外科
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目(81101947);广东省科技社会发展项目(2012B032000006)
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【目的】观察脂多糖(LPS)对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用。【方法】体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯LPS刺激组、LPS+P38抑制剂(SB203582)组和LPS+m TOR抑制剂(rapamycin)组。将前期构建的载体pc DNA3.1-GFP-LC3,转染RAW264.7,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况。q RT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 m RNA表达水平的改变。利用Western blotting检测LC3-Ⅱ、p-P38、P38蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬过程中p38/MAPK通路的作用。【结果】在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;q RT-PCR检测到自噬相关基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,和Bnip3 m RNA的表达在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;Western blotting检测发现p-P38在饥饿状态组、LPS组和LPS+rapamycin组中表达明显升高;LC3-Ⅱ的表达在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组中表达要高于对照组和LPS组。【结论】LPS参与巨噬细胞自噬的调控,除经典m TOR通路之外,p38/MAPK通路是其抑制通路之一。
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