【摘 要】
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目的:克隆ST8SiaV基因启动子及构建ST8SiaV基因启动子-pGL3-Basic-GFP表达载体,并对该载体进行功能鉴定.方法:①基于NCBI公布的大鼠基因组ST8SiaV基因序列,以SD大鼠肝基因组D
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);教育部留学回国人员科研启动基金
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目的:克隆ST8SiaV基因启动子及构建ST8SiaV基因启动子-pGL3-Basic-GFP表达载体,并对该载体进行功能鉴定.方法:①基于NCBI公布的大鼠基因组ST8SiaV基因序列,以SD大鼠肝基因组DNA为模板,采用PCR方法,扩增ATG起始密码子上游1.7 kb片段.②分离、纯化PCR产物,与pMD 18-T载体相连,构建克隆载体,转化大肠杆菌(DH5α),筛选阳性克隆并测序.③启动子片段进行SacⅠ和BglⅡ双酶切,克隆进pGL3-Basic质粒载体.为探索该基因在神经干细胞分化过程的活体表达,将pGL3-Basic的luciferase报告基因替换为GFP,构建成promoter-pGL3-Basic -GFP表达载体.④将构建的表达载体电转染SD大鼠神经干细胞,对该表达载体进行生物学功能鉴定.结果与结论:成功地克隆到1.7 kb的具有生物学活性的ST8SiaV基因启动子,并构建了适于活体研究的promoter-pGL3-Basic-GFP表达载体,为进一步研究该基因的启动子区转录及调控作用奠定了基础.
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