【摘 要】
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目的 利用实时PCR技术,建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法.方法 根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标(ROX标记),建立检测所有副溶血弧菌
【机 构】
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深圳出入境检验检疫局,厦门大学生命科学学院分子诊断实验室,珠海出入境检验检疫局
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目的 利用实时PCR技术,建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法.方法 根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标(ROX标记),建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法.通过与文献报道的检测直接耐热溶血素(TDH)基因的实时PCR体系合并,建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法.结果 通过对9个属的101株菌株进行试验,所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号(toxR+),其余菌株均检测为阴性,其中46.2%(24/52)的副溶血弧菌产生HEX阳性信号(tdh+).检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100 fg/PCR体系,菌液灵敏度为59.2～592 CFU/ml或2.96～29.6 CFU/PCR体系.另外成功构建了双重实时PCR体系,能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测.结论 建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株,从而为食品的安全检疫提供有效手段.
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